Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № П710 от 12 августа 2009 г. Исполнитель: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кабардино-Балкарский государственный университет им. Х. М. Бербекова»

4.5 Методы качественного и количественного определения нуклеиновых кислот В наших исследованиях мы использовали гистохимический метод выявления нуклеиновых кислот по Эйнарсону (Кононский, 1976) с последующим количественным анализом с применением фотоцитометрии. Для этого кусочки поджелудочной и щитовидной желез экспериментальных животных размером в 1 см3 фиксировали в жидкости Карнуа. Обезвоживание и заливку в парафин проводили по общепринятой методике. Готовили срезы толщиной 5 мкм. Срезы окрашивали галлоцианин-хромовыми квасцами при комнатной температуре в течение 48 часов. Теоретическое обоснование метода разработано Эйнарсоном 1951г. Галлоцианин — краситель оксазинового ряда. При кипячении с квасцами образуется хромовый краплак галлоцианина в виде трех комплексов: лак-катион, лак-гидроксид и лак-сульфат. Взаимодействуя с нуклеиновыми кислотами лак-катион образует солевые связи с остатками фосфорной кислоты нуклеотидов. Такой комплекс окрашен в темно-синий цвет и считается очень специфическим и стабильным. Окраска для фотоцитометрирования проводится при рН=1,64. Интенсивность окраски находится в прямой связи с концентрацией нуклеиновых кислот. Для определения количества нуклеиновых кислот в ацинарных клетках мы применили цитофотометрический метод. Цитофотометрия основана на измерении доли ослабления светового потока, проходящего через клетку. Ослабление света вследствие поглощения его продуктами цитохимической реакции или веществами клетки называется величиной пропускания или прозрачности и обозначается буквой Т. Т — выражает в относительных единицах долю света, прошедшего через клетку: , где J0 — интенсивность света, падающего на клетку, а J — интенсивность проходящего света. Ослабление света называется оптической плотностью (Е) объекта. Она является математической функцией пропускания: Основной физический закон, на котором основывается фотометрия, это — закон Ламберта-Бера, который заключается в том, что каждый бесконечно тонкий слой внутри однородной среды поглощает определенную долю входящего в него потока излучения (параллельный пучок лучей монохроматического света), пропорциональную толщине слоя и концентрации в нем молекул поглощающего вещества. Оптическая плотность исследуемого вещества прямо пропорциональна концентрации поглощающего вещества (С), толщине объекта (d) и зависит от коэффициента поглощения света исследуемым веществом (k). Е = k× C × d, отсюда Большое значение имеет толщина поглощающего слоя. Толщина срезов в нашем случае постоянна и равнялась 5 мкм. Она определялась прямым измерением путем последовательного соприкосновения кончика микрокатора с верхней поверхностью среза и предметным стеклом (Автандилов, 1990). Если толщина объекта известна, то определение содержания исследуемого вещества сводится к измерению ослабления света препаратом. Применение закона Ламберта-Бера к негомогенным структурам может привести к ошибкам. Поэтому размеры сечения светового луча нужно выбирать такими, чтобы не гомогенность фотометрируемого участка была невелика. При работе с МФ-4 имеется возможность автоматически перемещать луч света по препарату с направленной записью плотности по направлению движения луча, т.е. сканировать. Тогда среднее значение оптической плотности равно: , где n — количество измерений. Для определения J0 часть срезов обрабатывали 2 М раствором HCl в течение 24 часов для экстракции нуклеиновых кислот из тиреоцитов и клеток ацинусов поджелудочной железы. Определение количества нуклеиновых кислот проводили с помощью микрофотометра МФ-4 в условных единицах. Исследования проводили за пределами максимального поглощения галлоцианинхромовых квасцов при 497 нм, так как для большинства объектов поглощение в максимуме слишком велико.

Похожие:

	Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № п 716 от... Исполнитель: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кабардино-Балкарский государственный...		Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № П1084 от... Исполнитель: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кабардино-Балкарский государственный...
	Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № П869 от 18... Исполнитель: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кабардино-Балкарский государственный...		Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № П1676 от... Исполнитель: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кабардино-Балкарский государственный...
	Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта №14. 740. 11.... Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кабардино-Балкарский государственный университет...		Отчет о выполнении 2 этапа Государственного контракта № П782 от 24... Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кабардино-Балкарский государственный университет...
	Отчет о выполнении 2 этапа Государственного контракта № П371 от 07... Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кабардино-Балкарский государственный университет...		Отчет о выполнении 2 этапа Государственного контракта №16. 740. 11.... Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кабардино-Балкарский государственный университет...
	Отчет о выполнении 4 этапа Государственного контракта №14. 740. 11.... О выполнении 4 этапа Государственного контракта №14. 740. 11. 1071 от 24. 05. 2011 г		Отчет о выполнении 2 этапа Государственного контракта №14. 740. 11.... «Московский государственный университет экономики, статистики и информатики (мэси)»
	Отчет о проделанной работе Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кабардино-Балкарский государственный...		Программа (мероприятие): Федеральная целевая программа «Научные и... Исполнитель: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Кабардино-Балкарский государственный...
	Программа (мероприятие): Федеральная целевая программа «Научные и... Исполнитель: федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кабардино-Балкарский...		Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта №16. 740. 11.... Программа (мероприятие): Федеральная целевая программа «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013...
	Отчет по исполнению I этапа Государственного контракта №05. 043.... Исполнитель (Поставщик): Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования города Москвы...		Отчет по исполнению I этапа Государственного контракта №05. 043.... Исполнитель (Поставщик): Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования города Москвы...