Василек шероховатый как перспективный источник гепатопротективного средства
Скачать 321.91 Kb.
|
На правах рукописи Ларькина Мария Сергеевна ВАСИЛЕК ШЕРОХОВАТЫЙ КАК ПЕРСПЕКТИВНЫЙ ИСТОЧНИК ГЕПАТОПРОТЕКТИВНОГО СРЕДСТВА 14.04.02. – фармацевтическая химия, фармакогнозия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Самара – 2011 Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор Ермилова Елена Васильевна Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор Халиуллин Феркат Адельзянович кандидат фармацевтических наук, доцент Воронин Александр Васильевич Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пермская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации Защита состоится «3» июня 2011 г. в 10 часов на заседании Диссертационного совета Д 208.085.06 при ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации по адресу: 443079, г. Самара, пр. К.Маркса, 165 Б. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО СамГМУ Минздравсоцразвития России (г. Самара, ул. Арцыбушевская, 171). Автореферат разослан «____»____________ 2011 г. У  ченый секретарь диссертационного совета, кандидат фармацевтических наук, доцент И.К. Петрухина ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность. Препараты из лекарственных растений, содержащие целый комплекс биологически активных веществ, действуют на различные системы организма, в том числе и на систему антиоксидантной защиты. Это обеспечивает возможность их использования для профилактики и комплексной терапии свободно-радикальных патологий. Ухудшение экологической обстановки, повышенное содержание нежелательных примесей в пище, растущее потребление медикаментов, алкогольная интоксикация – эти и другие факторы привели к увеличению частоты токсических поражений печени, которая является основным органом синтеза и депонирования антиоксидантов и центром детоксикации прооксидантных веществ. Таким образом, подавление процессов активации свободно-радикального окисления, играющих ключевую роль в повреждении липидов мембран гепатоцитов в патогенезе заболеваний органов гепатобилиарной системы, является важным свойством гепатозащитных препаратов. Среди веществ с гепатозащитными свойствами выделяют сравнительно небольшую группу гепатопротекторов, обладающих терапевтическим влиянием на печень (легалон, карсил, силимар, силибор, катерген, эссенциале и другие) (Оковитый С.В., 2006). По популярности среди лекарственных средств растительного происхождения, применяемых per os, можно выделить группу препаратов расторопши (карсил, легалон, силибор и силимар), большинство из которых являются импортными. Важно отметить, что получение данных препаратов производится по трудоемкой технологии с использованием токсических и дорогих растворителей (хлороформ, тетрахлорметан и др.), что ведет к удорожанию продукции. Поэтому актуальна проблема разработки новых отечественных гепатопротективных фитопрепаратов, обладающих антиоксидантным действием, на основе растений Сибири и Дальнего Востока. Перспективным в этом плане является василек шероховатый (Centaurea scabiosa (L.) Maxim., сем. Asteraceae), применяемый в народной медицине при болезнях печени. Цель работы – на основании фармакогностического изучения обосновать возможность применения василька шероховатого в качестве источника гепатопротективного средства, обладающего антиоксидантным действием. Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
Научная новизна. Впервые проведен общий фитохимический анализ надземной части василька шероховатого и изучен компонентный состав доминирующих групп биологически активных соединений (фенольных соединений и полисахаридов). Хроматографией на бумаге в надземной части C. scabiosa L. идентифицировали кофейную, феруловую, коричную, п-кумаровую, галловую и салициловую кислоты, рутин, байкалеин, изокверцитрин. Впервые из василька шероховатого выделены флавоноиды гиспидулин, апигенин, лютеолин, хризоэриол и сложные эфиры карбоновых кислот, а также выделены скутелляреин, кофейная кислота, -ситостерол, ранее описанные для данного растения. Разработаны методики качественного обнаружения и количественного определения в надземной части василька шероховатого флавоноидов и гидроксикоричных кислот. Впервые экспериментально обоснована возможность использования василька шероховатого в качестве источника гепатопротекторного средства, обладающего антиоксидантным действием, и целесообразность его стандартизации по флавоноидам и гидроксикоричным кислотам. Изучена динамика накопления указанных групп биологически активных веществ. Впервые проведено анатомическое исследование надземной части василька шероховатого и выявлены диагностические микроскопические признаки вида. На основе проведенных исследований предложен способ получения сухого экстракта с гепатопротективной и антиоксидантной активностями и определены основные показатели его качества. Практическая значимость. На основании проведенных фармакогностических исследований для медицинской практики предложен новый вид лекарственного растительного сырья в качестве гепатопротекторного средства, обладающего антиоксидантным действием. Результаты микроскопических и фитохимических исследований использованы для разработки методик диагностики и определения качества надземной части василька шероховатого и заложены в проект Фармакопейной статьи (ФС) «Василька шероховатого трава». Для углубленных фармакологических исследований в качестве гепатопротективного средства предложен сухой экстракт василька шероховатого, полученный на 70% этаноле. Получено положительное решение о выдаче патента на изобретение по заявке №2009100195/15(000290) «Гепатопротективное средство, обладающее антиоксидантной активностью, и способ его получения» (18 января 2011 г). Внедрение. Для студентов и аспирантов кафедр фармацевтической химии и фармакогнозии с курсами ботаники и экологии ГОУ ВПО СибГМУ Минздравсоцразвития России, а также кафедры физиологии растений и биотехнологии Биологического института ГОУ ВПО «Томский государственный университет» разработаны методические рекомендации на тему «Методика последовательного количественного определения флавоноидов и гидроксикоричных кислот в лекарственном растительном сырье», в которых использованы материалы диссертации. Основные положения, выносимые на защиту:
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на 63-й и 65-ой Международной студенческой научной конференции им Н.И. Пирогова (Томск, 2004, 2006), IV Всероссийской научной конференции «Химия и технология растительных веществ» (Сыктывкар, 2006), II Международной научной конференции «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений (Алматы, 2007), V Всероссийской научной конференции «Химия и технология растительных веществ» (Уфа, 2008), «Конгрессе молодых ученых» (Томск, 2008), IV Всероссийской научной конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул, 2009). Работа выполнена в соответствии с планом научных исследований ГОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (№ государственной регистрации 01200602076 от 14. 02. 2006 г.). Публикации. По результатам работы опубликовано 15 печатных работ, в том числе 4 статьи в периодических изданиях, рекомендованных ВАК РФ. Экспериментальные исследования по теме диссертации выполнены на кафедре фармацевтической химии СибГМУ (г. Томск), а также в сотрудничестве с коллективами следующих научных организаций: Центральная научно-исследовательская лаборатория (ЦНИЛ) СибГМУ (отделение биохимии), НИИ органической химии СО РАН (г. Новосибирск), НИИ Фармакологии ТНЦ СО РАМН (г. Томск), Томский политехнический университет (кафедра аналитической химии, г. Томск). Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 147 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, пяти глав экспериментальных исследований, выводов, списка литературы и приложений на 37 страницах. Работа иллюстрирована 30 таблицами, 31 рисунками. Библиографический указатель включает 267 источников литературы, из которых 85 зарубежных. ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объекты и методы исследования Объектом исследования служила надземная часть василька шероховатого (ВШ) (Centaurea scabiosa L.), собранная в 2006–2007 гг. в Томской и Кемеровской областях. Обнаружение основных групп биологически активных веществ и изучение компонентного состава фенольных соединений и полисахаридов надземной части ВШ проводили с помощью общепринятых методов и приемов фитохимического анализа. Для разделения сложных смесей веществ и выделения индивидуальных соединений применяли избирательную жидкостную экстракцию, колоночную хроматографию. Строение выделенных веществ устанавливали с привлечением УФ-, ИК- спектроскопии, ВЭЖХ, масс- и хромато-масс-спектрометрии, 1Н-ЯМР-спектроскопиии. Антиоксидантную активность (АОА) изучали вольтамперометрическим методом, антирадикальную активность (АРА) – спектрофотометрическим методом. Изучение гепатопротекторной активности исследуемого экстракта проводили на 56 беспородных крысах-самцах массой 180-220 г с острым токсическим поражением печени тетрахлорметаном. Гепатит вызывали введением 50% раствора тетрахлорметана на растительном масле в дозе 1 мл/кг массы крысы в течение 4 дней. В последующие шесть дней вводили животным экстракт ВШ, полученный на 70% этаноле, в дозах 100, 200 и 400 мг/кг и препарат сравнения (карсил) в дозе 100 мг/кг массы крысы внутрижелудочно в виде суспензии на 1% крахмальной слизи, а также эквиобъемное количество растворителей. Острую токсичность экстракта ВШ определяли по методике Е. Buchby на крысах массой 200-250 г при внутрижелудочном способе введения. Стандартизацию цельного и измельченного сырья проводили согласно методикам ГФ XI. При разработке проекта ФС на сырье руководствовались ОСТ 91500.05.001-00 «Стандарты качества ЛС. Основные положения». Микроскопические признаки устанавливали на основании анатомического исследования частей растения. Просмотр и фотографирование препаратов выполняли с помощью микроскопа Carl Zeiss (увеличения 7х1,5х4,5; 7х1,5х8; 7х1,5х20; 7х1,5х40), цифрового фотоаппарата «Olympus Camedia» digital compact camera C-4000 zoom и оптико-механического согласователя. Снимки обрабатывали на компьютере в программе «Adobe Photoshop 5,5». Статистическую обработку полученных результатов проводили, используя пакет программ StatSoft Statistica v 6.0 с определением средней арифметической (М) и ее ошибки (m). Достоверность различий оценивалась с использованием параметрического (t-критерий Стьюдента) и непараметрического (критерия Вилкоксона) методов. Различия считались достоверными при р < 0,05. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Фитохимическое исследование надземной части василька шероховатого В результате проведенных исследований было выявлено, что в надземной части ВШ присутствуют флавоноиды (ФЛ), гидроксикоричные кислоты (ГКК), дубильные вещества, кумарины, полисахариды (ПС), сесквитерпеновые лактоны, аскорбиновая кислота, каротиноиды и аминокислоты и отсутствуют алкалоиды, иридоиды и экдистероиды (табл. 2). Нами проведено более подробное исследование фенольных соединений и полисахаридов василька шероховатого. Изучение фенольного комплекса василька шероховатого Анализ хроматографических данных водного экстракта и экстрактов, полученных на 40% и 70% этаноле, показал, что в состав экстрактов входят 20 – 25 фенольных соединений, из них 10 – 13 являются ФЛ, 10 – 12 – кумаринами, фенолокислотами и ГКК. Для количественного определения ФЛ использовали метод дифференциальной спектрофотометрии, основанный на их способности образовывать с алюминия хлоридом комплексы, устойчивые в кислой среде (содержание флавоноидов – 2,85±0,19% в пересчете на рутин) (табл. 2). Количественное определение ГКК проводили с использованием двух методов: 1) по собственному поглощению ГКК в УФ-области и 2) экстракционно-спектрофотометрическим. Найдено, что содержание ГКК в надземной части ВШ в пересчете на кофейную кислоту составило первым методом 3,65±0,07% и вторым методом 1,60±0,13%. Полученные данные позволяют сделать вывод о рациональности количественного определения суммы ГКК в надземной части ВШ вторым методом. Исследование полисахаридного комплекса василька шероховатого Фракционное разделение полисахаридного комплекса на фракции (табл. 2) показало наличие значительных количеств фракций ПС (в сумме около 35%), что свидетельствует о перспективности использования надземной части ВШ в качестве источника ПС. Для определения количественного содержания ВРПС использовали два метода: гравиметрический (ГФ XI) и антроновый метод, подобрав рациональные условия для исследуемого растения. Определение количественного содержания ПВ гравиметрическим методом было проведено из шрота, оставшегося после определения ВРСП. При исследовании влияния различных факторов на полноту извлечения ВРПС и ПВ установлено, что максимальное их извлечение достигается при 3-х кратной экстракции на кипящей водяной бане сырья с размером частиц 2 мм (соотношении сырье экстрагент 1:20, 1:20, 1:10 соответственно) в течение 30 мин. Содержание ВРПС в надземной части ВШ составило 6,07±0,12% и ПВ 10,10±0,15%. По модифицированной нами методике определения ВРПС антроновым методом найдено, что содержание ВРПС в надземной части в пересчете на глюкозу составило 5,03±0,12%. Результаты исследования содержания ВРПС и ПВ по органам растения показали наибольшее содержание их в листьях (табл. 1). Таблица 1 |
Добавить документ в свой блог или на сайт
Похожие:
 | Публичный отчет муниципального бюджетного дошкольного образовательного... Наименование учреждения: Муниципальное бюджетное дошкольное образовательное учреждение «Детский сад комбинированного вида №17 «Василёк»... |  | Исследовательская работа «Мусор- источник загрязнения окружающей среды» Откуда же берется мусор? «Как же сократить это безумное количество выбрасываемого мусора?». «Как он влияет на окружающую природу».... |
| Перспективный план работы на лето в старшей группе Воспитатели Беседы: «Как и чем можно порадовать близких», «Кто и зачем придумал правила поведения», «Как вы помогаете взрослым», «Мои хорошие... | | Педагоги анализируют методическую литературу, подбирают необходимые... Выявлены проблемы во взаимоотношениях детей с членами их семей, составлен перспективный тематический план работы с детьми и членами... |
| Первые мысли о применении крови с лечебной целью появились задолго... Сравнительно недавно было предложено фракционирование крови и приготовление из нее лечебных препаратов, в связи с чем значительно... | | Инновационного педагогического опыта Источник изменений (противоречия, новые средства обучения, новые условия образовательной деятельности) |
| Переговоры РФ и США по усыновлению сняли все вопросы. Источник: «KM. ru» Астахов: Российско-американские дети. Источник: «Голос России» | | Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Источник изменений (противоречия, новые средства обучения, новые условия образовательной деятельности, др.) |
| Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Источник изменений (противоречия, новые средства обучения, новые условия образовательной деятельности, др.) | | Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Источник изменений (противоречия, новые средства обучения, новые условия образовательной деятельности, др.) |
| Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Источник изменений (противоречия, новые средства обучения, новые условия образовательной деятельности, др.) | | Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Источник изменений (противоречия, новые средства обучения, новые условия образовательной деятельности, др.) |
| Инновационного педагогического опыта (ипо) Система приемов формирования... Источник изменений (противоречия, новые средства обучения, новые условия образовательной деятельности, др.) | | Актуальность данной темы заключается в том, что развитие теории государства... В условиях такой многозначности использование данного понятия в качестве научной категории связано с серьезными проблемами. При употреблении... |
| Учитель физики В наши дни информацию рассматривают как источник ресурсов наравне с трудом и капиталом, а информационные системы и технологии – как... | | Инновационного педагогического опыта (ипо) Система работы по теме:... Источник изменений (противоречия, новые средства обучения, новые условия образовательной деятельности, др.) |
