Автореферат диссертации на соискание ученой степени

Гетерогенность NK-клеток в тесте на дегрануляцию. Тест на экстернализацию CD107a позволил установить, что лишь меньшая часть NK-клеток (в частности, меньшая часть высокоцитотоксичной субпопуляции CD56dim NK-клеток) дегранулирует при взаимодействии с клетками К562. Эти данные сходны с данными других групп (Alter et al., 2004; Bryceson et al., 2005; Anfossi et al., 2006). «Недегранулирующие» NK-клетки, тем не менее, тоже активируются, о чем свидетельствует падение на них поверхностной экспрессии CD16 и CD314 (рис. 3). Рисунок 3. Снижение уровня поверхностного CD16 и CD314 при активации и дегрануляции NK-клеток здоровых доноров. СИФ CD16 (4 донора; A) и CD314 (7 доноров; Б) на NK-клетках, инкубированных 4 ч без активаторов и на CD107a– и CD107a+ NK-клетках, инкубированных с K562. *p<0,05, **p<0,01; Б — тест Уилкоксона, А — парный t-тест (различия в тесте Уилкоксона недостоверны из-за малого N). Горизонтальные линии на А и Б — медианы. Можно предположить, что среди циркулирующих NK-клеток (CD56dim NK-клеток) присутствует субпопуляция с немедленными эффекторными свойствами, и именно эта «эффекторная» субпопуляция дегранулирует при кратковременной (до 4 ч) инкубации с клетками-мишенями. Penack et al. (2005) показали, что только CD107a+, но не CD107a– NK-клетки, отсортированные после 4-часовой коинкубации с мишенями, обладают NK-активностью при повторном взаимодействии с мишенями. Если «эффекторная» субпопуляция NK-клеток существует, то она, вероятно, должна обладать характерным набором маркеров, который отличал бы ее от остальных NK-клеток. Окраска на дополнительные поверхностные маркеры показала, что при инкубации с клетками K562 процент дегранулирующих NK-клеток выше в субпопуляциях CD94bright и CD159a+ по сравнению с CD94dim и CD159a–, а также в субпопуляции CD335dim по сравнению с CD335bright (таблица 13). CD8+/CD8– и CD57+/CD57– NK-клетки не различались по дегрануляционному ответу. Более того, сочетание маркеров CD94 и CD335 позволило выявить CD94brightCD335dim субпопуляцию, обладающую особенно высоким дегрануляционным ответом на клетки K562 — 18,9 (13,0-27,7)%. Таблица 13. Процентное содержание дегранулирующих (CD107a+) клеток в указанных субпопуляциях CD56dim NK-клеток. Медианы (10-й—90-й процентили). Маркер (кол-во опытов) Субпопуляция % дегранулирующих NK-клеток Без активаторов K562 CD8 (n=8) CD8+ 0,2 (0,0-0,4) 7,2 (3,6-16,8) CD8– 0,5 (0,1-0,7) 7,7 (3,6-13,6) CD57 (n=8) CD57+ 0,2 (0,0-0,6) 6,6 (2,5-16,7) CD57– 0,6 (0,2-1,0) 9,0 (3,6-15,4) CD94 (n=8) CD94bright 0,2 (0,1-0,6) 9,6 (3,3-18,6)* CD94dim 0,6 (0,2-0,9) 5,1 (3,0-13,4) CD159a (n=5) CD159a+ 0,3 (0,1-0,5) 6,9 (4,8-15,9)* CD159a– 0,3 (0,2-0,5) 5,2 (3,2-7,7) CD335 (n=5) CD335bright 0,2 (0,0-0,4) 2,9 (2,4-6,3)* CD335dim 0,4 (0,3-0,5) 7,7 (5,4-15,2) *p < 0,05 при сравнении CD94bright и CD94dim, CD159a+ и CD159–, CD335bright и CD335dim субпопуляций, при стимуляции K562 (тест Уилкоксона). Результаты по CD94 и CD159a согласуются с данными Anfossi et al. (2006) и могут рассматриваться как свидетельство «обучения» NK-клеток: согласно концепции обучения, цитотоксический потенциал приобретают только те NK-клетки, которые экспрессируют хотя бы один ингибиторный рецептор, способный распознать собственный антиген MHC (например, CD94/CD159a). Результаты по CD335 являются новыми. Пока не ясно, почему NK-клетки, экспрессирующие более высокие уровни активационного рецептора CD335 (NKp46), дегранулируют менее интенсивно. Однако следует отметить, что дегрануляция той или иной степени выраженности отмечалась во всех исследованных субпопуляциях NK-клеток (таблица 13); другими словами, ни один из исследованных маркеров не является «абсолютным» маркером «эффекторных» NK-клеток. ВЫВОДЫ Разработан комплекс методов, позволяющий оценивать основные показатели NK-клеток: процентное содержание NK-клеток среди МНК, субпопуляционный состав NK-клеток, NK-активность МНК, дегрануляцию NK-клеток и их субпопуляций по экстернализации CD107a при рецепторной и нерецепторной стимуляции, определение внутриклеточного содержания CD107а и перфорина в NK-клетках. Методологической основой комплекса является проточная цитометрия. Подтверждено значение CD107a как маркера дегрануляции NK-клеток. CD107a является более чувствительным и специфичным маркером дегрануляции NK-клеток, чем CD63. Лишь небольшая часть циркулирующих NK-клеток и их CD56dim субпопуляции дегранулирует при взаимодействии с NK-чувствительными клетками-мишенями K562. При этом значительная часть NK-клеток активируется, но не дегранулирует. Более высокий процент дегранулирующих клеток наблюдается в субпопуляциях CD56dim NK-клеток, экспрессирующих CD159a (CD159a+), высокий уровень CD94 (CD94bright) и низкий уровень CD335 (CD335dim). У здоровых доноров в возрасте до 50 лет NK-активность МНК коррелирует с процентным содержанием NK-клеток среди МНК и с процентом NK-клеток, дегранулирующих при взаимодействии с клетками K562. NK-активность МНК не коррелирует с внутриклеточным содержанием перфорина в NK-клетках и с количеством гранул, выбрасываемых в среднем одной NK-клеткой при взаимодействии с клетками K562. У лиц пожилого возраста (старше 65 лет) снижена дегрануляция NK-клеток в ответ на различные виды стимуляции при неизмененной NK-активности МНК; нарушена корреляция между NK-активностью и процентом NK-клеток, дегранулирующих при взаимодействии с K562. При синдроме Вискотта-Олдрича резко снижена дегрануляция NK-клеток в ответ на рецепторный стимул (K562), в меньшей степени на нерецепторные стимулы, что сопровождается резким снижением NK-активности у этих больных; корреляция между показателями дегрануляции NK-клеток и NK-активностью МНК отсутствует. При хронической гранулематозной болезни функциональные показатели NK-клеток существенно не изменены. У пациентов с часто рецидивирующим герпесом как в стадии обострения, так и в стадии ремиссии умеренно снижена дегрануляция NK-клеток в ответ как на рецепторную, так и на нерецепторную стимуляцию. Достоверное снижение NK-активности имеется только в стадии ремиссии. В стадию обострения, но не в стадию ремиссии, нарушена корреляция между NK-активностью и процентом NK-клеток, дегранулирующих при взаимодействии с K562. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Муругин В.В., Муругина Н.Е., Продеус А.П., Зимин С.Б., Кондратенко И.В., Пинегин Б.В., Пащенков М.В. Дегрануляция NK-клеток у больных синдромом Вискотта-Олдрича и хронической гранулематозной болезнью. Иммунология, 2009, т.30(6), стр.376-382. Пащенков М.В., Муругина Н.Е., Муругин В.В., Пинегин Б.В. Выявление и характеризация цитолитических CD8+ и CD4+ Т-клеток. Иммунология, 2010, т.31(1), стр.4-12. Муругин В.В., Зуйкова И.Н., Муругина Н.Е., Шульженко А.Е., Пащенков М.В., Пинегин Б.В. Дефицит дегрануляции NK-клеток у больных хронической рецидивирующей герпесвирусной инфекцией. Иммунология, 2010, т.31(6),стр.284-289. Murugin V.V., Zuikova I.N., Murugina N.E., Shulzhenko A.E., Pinegin B.V., Pashenkov M.V. Reduced degranulation of NK cells in patients with frequently recurring herpes. Clin. Vaccine Immunol., 2011, v.18, p.1410-1415. Муругин В.В., Муругина Н.Е., Пащенков М.В., Пинегин Б.В. Дегрануляция NK- и T-клеток у лиц пожилого возраста. Иммунология, 2011, т.32(5), стр.239-243. Муругин В.В., Муругина Н.Е., Продеус А.П., Зимин С.Б., Кондратенко И.В., Пащенков М.В., Пинегин Б.В. Дегрануляция NK-клеток и CD8+ Т-клеток у больных синдромом Вискотта-Олдрича и хронической гранулематозной болезнью. Российский Аллергологический Журнал, 2009, т.3, стр.142. Муругина Н.Е., Муругин В.В., Чирвон Е.А., Пинегин Б.В., Пащенков М.В. Применение многоканальной проточной цитометрии для изучения цитотоксических CD8+ и CD4+ Т-клеток. Российский Аллергологический Журнал, 2009, т.3, стр.158. Пащенков М.В., Симонова А.В., Аршинова С.С., Мартынов А.И., Ярилин А.А., Пинегин Б.В., Кулаков В.В.,Климова С.В., Никонова М.Ф., Шарова Н.И., Донецкова А.Д., Литвина М.М., Муругин В.В. Оценка клеточного иммунитета. Пособие для врачей клинической лабораторной диагностики, Москва, 2009, стр.18-21. Муругин В.В., Муругина Н.Е., Пащенков М.В., Пинегин Б.В. Дегрануляция Т- и NK-клеток у лиц пожилого возраста. Российский Аллергологический Журнал, 2011, т.4, стр.246-247. Пащенков М.В., Муругин В.В., Пинегин Б.В. Применение мультипараметрической проточной цитометрии для одновременной оценки функции и фенотипа NK-клеток. Российский Аллергологический Журнал, 2011, т.4, стр.283-284.

Похожие:

	Е. Б. Особенности гражданско-правового регулирования договора патентной... Абдакимова, Д. А. Источники международного права интеллектуальной собственности : автореферат диссертации на соискание ученой степени...		Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата филологических наук. Саратов, 1974 Котюрова М. П. Лингвистическое выражение связности речи в научном стиле (сравнительно с художественным) : Автореферат диссертации...
	Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных... Ведущая организация – фгоу впо кемеровский государственный сельскохозяйственный институт		А. Г. Свинаренко Котюрова М. П. Лингвистическое выражение связности речи в научном стиле (сравнительно с художественным) : Автореферат диссертации...
	Тема доклада Котюрова М. П. Лингвистическое выражение связности речи в научном стиле (сравнительно с художественным) : Автореферат диссертации...		Литература Автореферат диссертации на соискание ученой степени ...
	14. 01. 17 – Хирургия автореферат диссертации на соискание ученой... «Средняя общеобразовательная школа №19 с углубленным изучением отдельных предметов»		Автореферат Диссертации На соискание ученой степени кандидата психологических наук по теме Оборудование: изображения гербов на листах, кроссворд, выставка литературы, энциклопедия, таблички, учебник по истории Саплина Е....
	Аннотации рабочих программ дисциплин Котюрова М. П. Лингвистическое выражение связности речи в научном стиле (сравнительно с художественным) : Автореферат диссертации...		Учебник: Русский язык. 9 класс Котюрова М. П. Лингвистическое выражение связности речи в научном стиле (сравнительно с художественным) : Автореферат диссертации...
	Тема урока Кол-во часов Котюрова М. П. Лингвистическое выражение связности речи в научном стиле (сравнительно с художественным) : Автореферат диссертации...		Клинико-экспериментальное исследование 14. 00. 35 – детская хирургия... «Средняя общеобразовательная школа №19 с углубленным изучением отдельных предметов»
	14. 01. 17 – хирургия автореферат диссертации на соискание ученой... «Новоубеевская основная общеобразовательная школа» Дрожжановского муниципального района Республики Татарстан		К общим закономерностям диффузии стилей вводные замечания Котюрова М. П. Лингвистическое выражение связности речи в научном стиле (сравнительно с художественным) : Автореферат диссертации...
	Иностранный язык (английский, немецкий, французский языки) Котюрова М. П. Лингвистическое выражение связности речи в научном стиле (сравнительно с художественным) : Автореферат диссертации...		Из фонда Национальной библиотеки Беларуси Абдакимова, Д. А. Источники международного права интеллектуальной собственности : автореферат диссертации на соискание ученой степени...