В Ы В О Д Ы
Мониторинг штаммов B. pertussis выявил особенности распространения и различия в генетической структуре штаммов, циркулирующих в различные периоды эпидемического процесса коклюшной инфекции, и показал, что в допрививочный период (1948 – 1959 гг.) и первые десять лет (1960 – 1969 гг.) проведения массовой иммунизации детского населения АКДС-вакциной, циркулировали штаммы B. pertussis с «вакцинными» аллелями генов, кодирующих основные факторы патогенности; в начале 70-х годов в популяции штаммов B. pertussis появились штаммы с новыми «невакцинными» аллелями генов, которые с начала 80-х годов заняли доминирующее положение в популяции.
Выявлены особенности генетической структуры штаммов B. pertussis, выделенных на современном этапе эпидемического процесса коклюшной инфекции. В настоящее время циркулируют штаммы B. pertussis с новым «невакцинным» ptxА1 аллелем гена коклюшного токсина (в 100% случаев), новыми «невакцинными» prn2 и prn3 аллелями гена пертактина (в 76,0% и 21,9% случаев, соответственно); распространение штаммов с «невакцинными» fim2-2 и fim3В аллелями фимбриальных генов происходит медленнее и встречается в популяции современных штаммов в 53,3% и в 83,4% случаев, соответственно. Изменений в структуре tcfA гена, кодирующего фактор колонизации трахеи, не обнаружено.
Современные штаммы B. pertussis, несущие новые «невакцинные» аллели, и вакцинные штаммы B. pertussis, используемые для производства АКДС-вакцины и несущие старые «вакцинные» аллели генов коклюшного токсина, пертактина и фимбриальных белков, имеют существенные различия генетической структуры. У современных штаммов B. pertussis произошли существенные изменения в структуре ptxA гена, кодирующего S1 субъединицу коклюшного токсина, prn гена, кодирующего пертактин, и в фимбриальном fim3 гене, кодирующем Fim3 белок.
Штаммы B. pertussis, характеризующиеся новыми «невакцинными» аллелями генов патогенности, обладают высокой степенью вирулентности (в 72,7% случаев) и высоким уровнем лейкоцитозстимулирующей активности (в 100% случаев), что является неблагоприятным прогностическим признаком тяжести течения инфекционного процесса коклюшной инфекции.
Разработан новый метод мониторинга штаммов B. pertussis на основе ПЦР-ПДРФ, позволяющий выявлять штаммы с новым ptxА1 аллелем гена коклюшного токсина, для наблюдения за популяцией B. pertussis, циркулирующей на современном этапе развития эпидпроцесса коклюшной инфекции.
Показаны высокая специфичность (100%), высокая чувствительность (103 м.кл.), высокая диагностическая эффективность (84,9% ± 4,9% (р < 0,001) нового впервые разработанного прямого ускоренного метода (LAMP-вариант), позволяющего выявлять возбудителя заболевания непосредственно из клинического материала больного в течение 9 – 10 часов. Данный метод позволяет обследовать больных как в ранние (с 3 дня), так и в поздние (в течение месяца) сроки заболевания, а также больных с различными формами клинического течения заболевания.
Подтверждено сохранение в циркуляции штаммов C. diphtheriae (в 66,7% случаях) с незначительными множественными единичными мутациями в tox гене, не приводящими к изменению первичной структуры белка дифтерийного токсина, что влияет на формирование генетической вариабельности вида. Мониторинг штаммов C. diphtheriae показал, что распространения штаммов C. diphtheriae с измененной структурой гена дифтерийного токсина (в положении 1252 tox гена), приводящей к изменению аминокислотного состава белка дифтерийного токсина, не произошло.
Получены новые знания о том, что в геноме C. diphtheriae биовара gravis имеется нуклеотидная последовательность (локус DIP0357 – amy ген), являющаяся генетической детерминантой, кодирующей амилазную активность – дополнительный фактор патогенности C. diphtheriae биовара gravis, и впервые определена нуклеотидная «мишень» в amy гене, выявляемая в ПЦР новыми сконструированными специфическими праймерами, для дифференциации штаммов C. diphtheriae двух биоваров, что имеет значение для создания диагностических препаратов.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
Мазурова И.К., Комбарова С.Ю., Мельников В.Г., Борисова О.Ю. Характеристика Corynebacterium diphtheriae, циркулирующих в России в период 1984 – 1998 гг. (микробиологический мониторинг в системе эпиднадзора за дифтерийной инфекцией) // Пособие для врачей – Москва. – 1999. – 26 Стр.
Комбарова С.Ю., Мельников В.Г., Борисова О.Ю., Костюкова Н.Н., Мазурова И.К. Риботипирование штаммов Corynebacterium diphtheriae, выделенных в России // в сборнике научных трудов МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского “Проблемы инфекционных болезней (эпидемиология и профилактика)”. – 2000. – С. 42 – 47.
Комбарова С.Ю., Мельников В.Г., Борисова О.Ю., Платонова Т.В., Соков Б.Н., Смердов Г.Н., Ушакова Н.С., Степанова Н.И., Бугаев Е.А., Мазурова И.К. Усовершенствование методики постановки полимеразной цепной реакции для выявления гена дифтерийного токсина // в сборнике научных трудов МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского “Проблемы инфекционных болезней (эпидемиология и профилактика)”. – 2000. – С. 47 – 52.
Мазурова И.К., Борисова О.Ю., Комбарова С.Ю., Мельников В.Г., Герасимова С.В., Андрусенко Е.Э., Цепляева Э.Д., Калугина Л.П. Некоторые особенности циркуляции биоваров gravis и mitis токсигенных и нетоксигенных штаммов Corynebacterium diphtheriae // в сборнике научных трудов МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского “Проблемы инфекционных болезней (эпидемиология и профилактика)”. – 2000. – С. 52 – 55.
Платонова Т.В., Мазурова И.К., Борисова О.Ю., Комбарова С.Ю., Мельников В.Г. Биологические свойства Corynebacterium diphtheriae и их влияние на клинику дифтерии у непривитых детей в условиях различной интенсивности эпидпроцесса // в сборнике научных трудов МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского “Проблемы инфекционных болезней (эпидемиология и профилактика)”. – 2000. – С. 52 – 59.
Мазурова И.К., Платонова Т.В., Комбарова С.Ю., Мельников В.Г., Борисова О.Ю., Костюкова Н.Н. Молекулярно-биологические свойства Corynebacterium diphtheriae и их влияние на клинику дифтерии у непривитых детей в периоды различной интенсивности эпидемического процесса // Материалы научно-практической конференции «Инфекционные болезни на рубеже XXI века», 24 – 26 мая, Москва. – 2000. – С. 75.
Борисова О.Ю., Мазурова И.К., Мельников В.Г., Комбарова С.Ю., Платонова Т.В., Андрусенко Е.Э. Антибиотикорезистентность штаммов Corynebacterium diphtheriae – новая проблема инфекционной патологии // Материалы международной конференции «Антибиотики и антибиотикорезистентность на пороге XXI века», Москва. – том 2. –2000. – С. 27 – 28.
Melnikov V.G., Zoysa A.De, Mazurova I.K., Kombarova S.J., Borisova O.J., Engler K.H., Efstratiou А. Molecular screening for the ‘identification’ of non-toxigenic tox bearing strains of Corynebacterium diphtheriae from the Russian Federation // Proceedings of the Sixth International Meeting of the European Laboratory Working Group on Diphtheria, 21 – 24 June, Brussels, Belgium. – 2000. – P. 60 – 61.
Mazurova I.K., Platonova T.V., Kombarova S.J., Melnikov V.G., Borisova O.J. Diphtheria in Russia: clinical and epidemiological features // Proceedings of the Sixth International Meeting of the European Laboratory Working Group on Diphtheria, 21 – 24 June, Brussels, Belgium. – 2000. – P. 33 – 34.
Мазурова И.К., Комбарова С.Ю., Мельников В.Г., Борисова О.Ю., Платонова Т.В., Бугаев Е.В. Ускоренные методы лабораторной диагностики и наблюдения за возбудителем дифтерийной инфекции // Методические рекомендации. – Москва. –2001. – 12 Стр.
Kombarova S., Kim C., Melnikov V., Reeves M., Borisova O., Mazurova I., Popovic T. Rapid identification of Corynebacterium diphtheriae clonal group associated with diphtheria epidemic, Russian Federation // Journal Infectious Diseases. – Vol. 7. - no. 1. – 2001. – Р. 133 – 136.
Комбарова С.Ю., Мазурова И.К., Мельников В.Г., Костюкова Н.Н., Волковой К.И., Борисова О.Ю., Платонова Т.В., Efstratiou А. Генетическая структура штаммов Corynebacterium diphtheriae, выделенных в России при разной интенсивности эпидемического процесса дифтерии // ЖМЭИ. – 2001. – № 3. – С. 3 – 8.
Мельников В.Г., Комбарова С.Ю., Борисова О.Ю., Мазурова И.К. Нетоксигенные штаммы Corynebacterium diphtheriae, несущие ген дифтерийного токсина // Пособие для врачей. – Москва. – 2002. – 12 Стр.
Мазурова И.К., Комбарова С.Ю., Мельников В.Г., Борисова О.Ю., Нарвская О.В., Костюкова Н.Н., Платонова Т.В., Волковой К.И., Прохоров В.А., Салова Н.Я., Андрусенко Е.Э., Цепляева Э.Д., Калугина Л.П., Кривопалова Н.С. Молекулярная эпидемиология дифтерии в России // Материалы VIII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, 26 – 28 марта, Москва. – 2002. – том 1. – С. 68 – 69.
Бугаев Е., Мельников В.Г., Комбарова С.Ю., Борисова О.Ю., Платонова Т.В., Шипулин Г.А., Малинина С.В., Корочкина М.Ю., Мазурова И.К.. Полимеразная цепная реакция в диагностике дифтерийной инфекции // Материалы VIII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, 26 – 28 марта, Москва. – 2002. – том 3. – С. 236 – 237.
Mazurova I.К., Melnikov V., Kombarova S.J., Borisova O., Bugaev E.A. Laboratory diagnosis of diphtheria as part of diphtheria surveillance in Russia // Proceedings of the Seventh International meeting of the European Laboratory working group on diphtheria, Vienna, Austria. – 2002. – Р. 53.
Borisova O., Melnikov V., Kombarova S.J., Mazurova I.К. Antibiotic-resistant Corynebacterium diphtheriae strains circulating in Russia // Proceedings of the Seventh International meeting of the European Laboratory working group on diphtheria, Vienna, Austria. – 2002. – Р. 79.
Kombarova S., Melnikov V., Borisova O., Platonova T.V., Mazurova I.K. Genotype characteristics of Corynebacterium diphtheriae strains in a period of low diphtheria incidence in Russia: 1997 to 2001 // Proceedings of the Seventh International meeting of the European Laboratory working group on diphtheria, Vienna, Austria. – 2002. – Р. 68 – 69.
Melnikov V., Kombarova S., Borisova O., Mazurova I.K. Etiological value of non-toxigenic tox-bearing (NTTB) Corynebacterium diphtheriae strains // Proceedings of the Seventh International meeting of the European Laboratory working group on diphtheria, Vienna, Austria. – 2002. – Р. 80.
Мазурова И.К., Борисова О.И., Петрова М.С., Мельников В.Г. Фено – и генотипического характеристика штаммов B. pertussis, выделенных от больных коклюшем в г. Москве // Материалы международной конгресса «Ликвидация и элиминация инфекционных болезней – прогресс и проблемы». – 2003. – С. 30.
Мельников В.Г., Комбарова С.Ю., Борисова О.Ю., Воложанцев Н.В., Веревкин В.В., Волковой К.И., Мазурова И.К. Характеристика нетоксигенных штаммов Corynebacterium diphtheriae, несущих ген дифтерийного токсина // ЖМЭИ. – 2004. – № 1. – С. 3 – 7.
Комбарова С.Ю., Мельников В.Г., Борисова О.Ю., Мазурова И.К. Комплексная система наблюдения за циркулирующими штаммами Corynebacterium diphtheriae // Пособие для врачей. – Москва. – 2004. – 34 Стр.
Borisova O.J., Кombarova S.J., Berens T.T., Vaizovaj А., Мazurova I.K. Phenotypic and genotypic characteristics of toxigenic C. diphtheriae isolated in the Central Federal District of Russia during 2002-2004 // Proceedings of the Eighth International meeting of the European Laboratory working group on diphtheria, 16 – 18 june, Denmark, Copenhagen. –2004. – Р. 45.
Кombarova S.J.,, Zotina R.K., Borisova O.J, Narvskaya O.V., Limeshenko E., Мazurova I.K. Circulation of toxigenic and non-toxigenic С. diphtheriae in period of decreasing morbidity of diphtheria in Russia // Proceedings of the Eighth International meeting of the European Laboratory working group on diphtheria, 16 – 18 june, Denmark, Copenhagen. – 2004. – Р. 43
Мазурова И.К., Борисова О.Ю., Комбарова С.Ю., Захарова Н.С., Алешкин В.А. Молекулярно-генетическая характеристика штаммов Bordetella pertussis, выделенных в различные периоды эпидемического процесса коклюшной инфекции // Журнал молекулярная генетика, микробиология и вирусология. – 2005. – № 4. – С. 21 – 25.
Kombarova S.Yu., Borisova O.Yu., Melnikov V.G., Mazurova I.K Monitoring the genes responsible for Сorynebacterium diphtheriae toxin production // Proceedings of the Ninth international meeting of the European laboratory working group on diphtheria, ELWGD and Diphtheria surveillance network (DIPNET), 15 – 17 November 2006, Voliagmeni, Greece. –2006. – P. 65.
Borisova O.Yu., Kombarova S.Yu., Volozhantsev N.V., Mazurova I.K. Investigation of the amylase gene structure of Сorynebacterium diphtheriae // Proceedings of the Ninth international meeting of the European laboratory working group on diphtheria, ELWGD and Diphtheria surveillance network (DIPNET), 15 – 17 November 2006, Voliagmeni, Greece –2006. – P. 66.
Мазурова И.К., Борисова О.Ю., Комбарова С.Ю., Петрова М.С., Грачева Н.М., Герасимова А.Г., Алешкин В.А., Савинкова В.С., Скачкова В.Г., Захарова Н.С., Мерцалова Н.У., Шинкарев А.С., Семенов Б.Ф. Особенности генетической структуры производственных штаммов для АКДС-вакцины и циркулирующих в настоящее время штаммов возбудителей коклюша и дифтерии // Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Вакцинология – 2006. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней», 21 – 22 ноября, Москва. – 2006. – С. 60 – 61.
Чистякова Г.Г., Борисова О.Ю., Лыткина И.Н., Мазурова И.К., Комбарова С.Ю., Петрова М.С., Мельникова А.М., Скачкова В.Г. Особенности эпидемического процесса коклюшной инфекции в Москве на современном этапе // ЖМЭИ. – 2005. – № 5. – С. 35 – 40.
Borisova O., Kombarova S.J., Zakharova N.S., Marjolein van Gent, Aleshkin V.A., Mazurova I.K., Mooi F. Antigenic divergence between Bordetella pertussis clinical isolates from Moscow, Russia and vaccine strains // J. Clinical and vaccine immunology. – 2007. –Vol. 14. – № 3. – Р. 234 – 238.
Шинкарев А.С, Мерцалова Н.У., Мазурова И.К., Борисова О.Ю., Захарова Н.С., Озерецковская М.Н., Зайцев Е.М., Поддубиков А.В., Брицина М.В., Бажанова И.Г. Современные штаммы Bordetella pertussis: молекулярная и иммунобиологическая характеристика // ЖМЭИ. – 2007. – № 4. – С. 20 – 25.
Борисова О.Ю., Комбарова С.Ю., Гадуа Н.Т., Петрова М.С., Герасимова А.Г., Пяева А.П., Скачкова В.Г., Захарова Н.С., Мерцалова Н.У., Мазурова И.К., Алешкин В.А. Полиморфизм генов, кодирующих основные факторы патогенности штаммов Bordetella pertussis // Материалы IX съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. – 2007. – том 1. – С. 50 – 51.
Комбарова С.Ю., Борисова О.Ю., Мельников В.Г., Гадуа Н.Т., Губина Н.И., Лосева Л.В., Савинкова В.С., Скачкова В.Г., Мазурова И.К., Алешкин В.А. Особенности структуры генов, ответственных за токсинообразование Сorynebacterium diphtheriae // Материалы IX съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. – 2007. – том 1. – С. 69 – 70.
Мазурова И.К., Комбарова С.Ю., Борисова О.Ю., Мельников В.Г., Алешкин В.А. Микробиологический и молекулярно-генетический мониторинг дифтерийной инфекции // Материалы IX съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. – 2007. – том 1. – С. 78 – 79.
Мазурова И.К., Борисова О.Ю., Комбарова С.Ю., Гадуа Н.Т., Алешкин В.А. Динамика изменчивости основных генов патогенности штаммов Bordetella pertussis, выделенных от больных коклюшем в г. Москве (1948 – 2005 гг.) // Журнал молекулярной медицины. – 2008. – № 1. – С. 40 – 45.
Борисова О.Ю., Комбарова С.Ю., Гадуа Н.Т., Мазурова И.К. Молекулярно-генетический метод ускоренного выявления штаммов Bordetella pertussis, обладающих различными ptx генами // ЖМЭИ. – 2008. – № 5 – С. 80 – 83.
Борисова О.Ю., Комбарова С.Ю., Гадуа Н.Т., Мерцалова Н.У., Шинкарев А.С., Захарова Н.С., Пяева А.П., Лыткина И.Н., Требунских И.П., Салова Н.Я., Савинкова В.С., Скачкова В.Г., Мазурова И.К. Молекулярно-генетический мониторинг штаммов Bordetella pertussis, выделенных в различные периоды эпидемического процесса коклюшной инфекции // Материалы четвертой международной конференции «Идеи Пастера в борьбе с инфекциями», 2 – 4 июня 2008 г., Санкт – Петербург. – 2008. – С. 7.
Изобретения
Борисова О.Ю., Комбарова С.Ю., Алешкин В.А., Мазурова И.К. Патент на изобретение «Способ дифференциации штаммов Bordetella pertussis» № 2299908, зарегистрированный в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 27 мая 2007 г.
Борисова О.Ю., Воложанцев Н.В., Комбарова С.Ю., Гадуа Н.Т., Мазурова И.К. Заявка на изобретение «Способ дифференцирования штаммов C. diphtheriae» № 2007140879/13(044745) от 07.11.2007; получено положительное решение о выдаче патента от 13.11.2008 г.
Борисова О.Ю., Мазурова И.К., Комбарова С.Ю., Гадуа Н.Т., Петрова М.С., Попова О.П., Алешкин В.А. Заявка на изобретение «Набор и ускоренный способ лабораторной диагностики коклюша» № 2007147797/13 (52390) от 25.12.2007; получено положительное решение о выдаче патента от 16.09.2008 г.
|
