Совершенствование диагностики возбудителей периимплантитов с использованием молекулярно-генетических методов исследования 14. 01. 14 Стоматология (мед науки) 03. 02. 03 Микробиология (мед науки)
Скачать 370.12 Kb.
|
                  На правах рукописи Хитаришвили Мария Васильевна Совершенствование диагностики возбудителей периимплантитов с использованием молекулярно-генетических методов исследования 14.01.14 – Стоматология (мед. науки) 03.02.03 – Микробиология (мед. науки) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва – 2012 Работа выполнена в ГБОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО МГМСУ Минздравсоцразвития России) Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор ПАНИН Андрей Михайлович доктор медицинских наук, доцент НИКОЛАЕВА Елена Николаевна Официальные оппоненты: Гончаров Илья Юрьевич - доктор медицинских наук, профессор (ГБОУ ВПО МГМСУ Минздравсоцразвития России) профессор кафедры реконструктивной хирургической стоматологии и имплантологии ФПДО). Быков Анатолий Сергеевич - доктор медицинских наук, профессор (ГОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет им. И. М. Сеченова Минздравсоцразвития России) профессор кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии. Ведущее учреждение: ФГБУ «Центральный научно–исследовательский институт стоматологии и челюстно–лицевой хирургии Минздравсоцразвития РФ» Защита состоится «____» ___________ 2012 г. в ___ часов на заседании диссертационного совета Д 208.041.03 при ГБОУ ВПО МГМСУ Минздравсоцразвития России по адресу: 127006 Москва ул. Долгоруковская д. 4. Почтовый адрес: 127473, Москва, ул. Делегатская д. 20 стр.1 С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московского государственного медико-стоматологического университета» (127206, г. Москва, ул. Вучетича, д. 10а) Автореферат разослан _____ ________________2012 г. Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор Ю.А. Гиоева Общая характеристика работы Актуальность проблемы В настоящее время одним из доступных широким слоям населения современных методов лечения частичного или полного отсутствия зубов является дентальная имплантация. Актуальной проблемой имплантологии являются осложнения, в том числе периимплантиты, сокращающие сроки функционирования имплантатов (Lindhe J., Meyle J.,2008). Известно множество причин дезинтеграции имплантата, являющихся основанием для последующего его удаления. Негативное воздействие могут оказывать образование гематомы над заглушкой внутрикостного элемента имплантата и ее нагноение; несоблюдение принципов атравматичного препарирования костного ложа, неадекватное закрытие операционной раны, травмирующие и вызывающие ишемию краев послеоперационной раны факторы, такие как рубцы и недостаточная глубина преддверия полости рта (Параскевич В.Л., 2011; Робустова Т.Г., 2003; Heasman P. et al., 2010). Причинами отторжения имплантата также может быть окклюзионная травма; нерациональная конструкция зубного протеза; неудовлетворительная гигиена полости рта (Блок М.С., 2011; Иванов А.С., 2011; Кулаков А.А., 2010; Миргазизов М.З. и соавт., 1985 - 2010; Annibali S. et al., 2011; Mombelli A., 2011; Uribe R. et al., 2004). Существует точка зрения, что воспаление тканей, окружающих имплантат, вызывает определенная микрофлора (Bürgers R. et al., 2010; Querynen M. et al., 2002, 2006). Различные пародонтопатогеные виды микробов могут участвовать в развитии воспаления в перимплантатных тканях. На заживление операционной раны после хирургического вмешательства влияет состояние общего и местного иммунитета (Робустова Т.Г., 1994 - 2011; Царев В.Н., 1993 - 2011; Heitz-Mayfield L.J., Lang N.P., 2010; Lee A., Wang H.L., 2010; Olivera M.A. et al., 2011; Pye A.D. et al., 2009). Сопутствующие системные заболевания у пациентов также могут оказывать негативное влияние на процессы остеоинтеграции и функционирования имплантатов. Так, при ишемической болезни сердца, патологии эндокринной системы часто выявляют нарушения иммунологической реактивности, как на клеточном, так и гуморальных уровнях, которые могут отражаться на течении послеоперационного периода и обусловливать, наряду с другими факторами, развитие воспаления (Koide M. et al., 2010). В связи с этим поиск современных высокочувствительных методов диагностики возможных возбудителей периимплантитов, а также изучение ответных реакций организма, состояния иммунитета, позволит существенно повысить качество лечения с использованием имплантатов. Анализ данных литературы показал отсутствие в РФ исследований, посвященных оценке роли в этиопатогенезе воспалительных процессов в тканях, окружающих имплантат ассоциаций пародонтопатогенных видов бактерий I (Porphyromonas gingivalis, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Tannerella forsythia) и II порядков (Prevotella intermedia, Treponema denticola, Parvimonas micra (Peptostreptococcus micros), Fusobacterium nucleatum / periodonticum, Campylobacter rectus, Eubacterium nodatum, Eikenella corrodens, Capnocytophaga spр. (S. gingivalis, C. ochraces, C. sputigena) и ответных реакций организма на их колонизацию, в том числе локальных проявлений таких факторов гуморального иммунитета, как про- и противоспалительные цитокины. Учитывая выше изложенное, более глубокое раскрытие механизмов развития воспалительных процессов в тканях пародонта у пациентов с искусственными дентальными имплантатами, разработка доступных критериев ранней диагностики воспалительных процессов в периимплантатных тканях в период функционирования имплантатов, является актуальным направлением развития современной стоматологии. Это позволит дать практическому врачу научно обоснованный подход к тактике ведения таких пациентов, а также существенно повысить качество лечения с использованием имплантатов. Цель исследования Повысить эффективность диагностики периимплантитов на основе данных изучения микробной флоры и цитокинового профиля. Задачи исследования
Научная новизна В представленной работе впервые в РФ выявлена зависимость между клиническими и микробиологическими проявлениями воспалительных процессов в тканях пародонта при периимплантите, вызвавшем отторжение дентального имплантата. Уточнена этиологическая роль A. actinomycetemcomitans, P. gingivalis, T. forsythia, P. intermedia и T. denticola, а также P. micra (P. micros), F. nucleatum / periodonticum, C. rectus, E. nodatum, E. corrodens, Capnocytophaga spр. (S. gingivalis, C. ochraces, C. sputigena) и установлена степень их участия в развитии острого и хронического воспаления в тканях пародонта у больных с периимплантитами. Изучены взаимосвязи бактериальной нагрузки в различных участках зубодесневой борозды у больных с периимплантитами и экспрессии цитокинов (IL-1β, IL-4, IL-6, IL-8, IL-17A, TNF-α, INF-γ). Практическая значимость Улучшение квалифицированной помощи пациентам с воспалительными осложнениями дентальной имплантации за счет более совершенной диагностики и более глубоких теоретических знаний развития и течения воспалительных процессов в периимплантитных тканях. Определен видовой состав основных наиболее вирулентных, а также потенциальных пародонтопатогенов у людей с осложнениями дентальной имплантации. Выявлены особенности локальной экспрессии провоспалительных и противовоспалительных цитокинов у больных с периимплантитами. Разработан алгоритм комплексной клинико-лабораторной, микробиологической и иммунологической диагностики воспалительных осложнений при дентальной имплантации. Полученный массив данных может быть использован в качестве контроля для дальнейших исследований проблемы воспалительных осложнений дентальной имплантации. Положения, выносимые на защиту
Личный вклад автора Автор самостоятельно участвовала в инструментально-лабораторном обследовании 42 больных, проведении операций хирургического лечения периимплантитов, удаления подвижных и поврежденных имплантатов, организации процесса обследования и дополнительных консультаций пациентов. Приняла активное участие в проведении молекулярно-биологических и иммунологических исследований. Автор самостоятельно анализировала материал и проводила статистическую обработку полученных данных. Внедрение результатов исследования Результаты исследования внедрены в практику работы кафедры факультетской хирургической стоматологии и имплантологии, кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии, лаборатории молекулярно - биологических исследований НИМСИ и Клинико - диагностического центра ГБОУ ВПО МГМСУ Минздравсоцразвития РФ. Работа выполнена по плану НИР МГМСУ, номер государственной регистрации 01200712904 Основные положения диссертационной работы внедрены в учебный процесс кафедры факультетской хирургической стоматологии и имплантологии; микробиологии, вирусологии, иммунологии ГОУ ВПО МГМСУ Минздравсоцразвития России. Материалы диссертации используются в процессе обучения студентов, интернов, клинических ординаторов и аспирантов. Апробация работы Основные положения диссертации доложены на XXXIII Итоговой конференции молодых ученых МГМСУ (Москва, 2011); VIII Всероссийской научно-практической конференции «Образование, наука и практика в стоматологии» (Москва, 2011); совместном заседании сотрудников кафедр факультетской хирургической стоматологии и имплантологии; микробиологии, вирусологии, иммунологии МГМСУ (протокол № 7 от 06 декабря 2011 г.). Публикации По материалам диссертации опубликовано 5 печатных работ, в том числе 3 ‒ в журналах из перечня ВАК РФ. Объем и структура работы Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, главы собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Материалы диссертации изложены на 161 странице машинописного текста. Работа иллюстрирована 48 рисунками и содержит 19 таблиц. Список литературы включает 44 отечественных и 162 иностранных источников. ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы исследования Проведено комплексное стоматологическое обследование 42 пациентов (25 женщин и 17 мужчин) в возрасте от 20 до 69 лет, обратившихся на кафедру факультетской хирургической стоматологии и имплантологии с осложнениями в области дентальных имплантатов, развившимися в период активного функционирования имплантатов. Из них в соответствии с критериями включения, не включения и исключения были отобраны 32 пациента (19 женщин и 13 мужчин), которым на основании данных клинического и лабораторного обследований был поставлен диагноз: периимплантит, ассоциированный с хроническим пародонтитом (МКБ-10; КОД- К.005) легкой или средней степени. По данным анамнеза, анкетирования и заключений общих специалистов у большинства пациентов (80 %) в анамнезе имелись сопутствующие соматические заболевания. Клиническое обследование включало анализ жалоб, анамнеза, показателей, отражающих состояние больного и местных изменений, в том числе индекс кровоточивости при зондировании SBI (Mulleman H.R., Son S., 1971), папиллярно-маргинально-альвеолярный индекс РМА (Parma C., 1960), пародонтальный индекс PI (Russel A., 1956). Гигиеническое состояние полости рта оценивали индексом контактных поверхностей (API) и упрощенным индексом гигиены полости рта (OHI-s, Greene J.C., Vermillion J.R. 1960, 1964). Выявляли наличие инфильтрата и отека слизистой оболочки в области воспалительного процесса. Степень резорбции костной ткани в области имплантатов определяли при рентгенологическом исследовании с использованием ортопантомографии, прицельной рентгенографии, компьютерной томографии. С помощью градуированного зонда измеряли глубину патологического костного кармана в области имплантата, определяли наличие гнойного экссудата. При выраженной подвижности имплантата, а также при резорбции костной ткани более половины его длины проводили удаление дентального имплантата, кюретаж костной раны. Рану вели по йодоформной турундой. Обязательным являлось выяснение наличия и длительности хронического пародонтита, характер проводимого лечения и его эффективность. Клинико-лабораторные исследования заключались в определении в содержимом зубодесневой борозды и материала из области удалённых имплантатов видового состава некоторых представителей пародонтопатогенных бактерий молекулярно-генетическими и содержание интерлейкинов иммунологическими методами. Исследуемый материал был отобран из 39 патологических костных карманов в области подвижных имплантатов, 29 участков со стабильными имплантатами, 30 наиболее глубоких пародонтальных карманов и 30 участков зубодесневой борозды в области естественных зубов без клинических признаков пародонтита у этих же пациентов. Образцы для исследования доставляли в лабораторию молекулярно-биологических исследований НИМСИ МГМСУ в течение 2-х часов. После центрифугирования образцов супернатант использовали для определения цитокинов, из осадка выделяли ДНК с помощью набора реагентов “Пробоподготовка Универсальная” (ООО НПФ “Генлаб”). Амплификацию маркеров пародонтопатогенных бактерий I порядка A. actinomycetemcomitans, T. forsythia (B. forsythus), P. gingivalis и пародонтопатогенов II порядка ‒ P. intermedia и T. denticola проводили в термоциклере “Терцик МС-2” (“ДНК-технология”, Москва) с помощью набора реагентов “Мультидент-5” (ООО НПФ “Генлаб”). Клонированные образцы ДНК анализировали гель-электрофорезом в 1,6 % агарозе после окрашивания бромистым этидием. Для амплификации ДНК пародонтопатогенов II порядка (P. micra (P. micros), F. nucleatum / periodonticum, C. rectus, E. nodatum, E. corrodens, Capnocytophaga spр. (S. gingivalis, C. ochraces, C. sputigena) использовали систему Мicro-IDent®plus компании Hain Lifescience (Германия). Амплифицированные образцы идентифицировали методом обратной гибридизации в соответствии с протоколом фирмы - производителя (Николаева Е.Н., 2011). Концентрацию IL-1β, IL-4, IL-6, IL-8, TNF-α, IL-17А и INF-γ в десневой жидкости определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа в десневой жидкости, отобранной с помощью бумажных эндодонтических штифтов стандартного размера (№ 30), используя набор реактивов HUMAN IL-17А (Hycult Bioteсh, The Netherlands) и наборы производства “Вектор - Бест” для других цитокинов. Объем десневой жидкости определяли по разнице весов бумажного штифта до и после пропитывания. Статистическую обработку полученных цифровых данных проводили с помощью критерия Стьюдента и представляли в виде М ± Δ, М – средняя арифметическая, а Δ – половина доверительного интервала. Достоверность различий в частоте выявления ДНК пародонтопатогенов рассчитывали с помощью непараметрического критерия хи - квадрат (2) с поправкой Yates на непрерывность выборки. В необходимых случаях, когда в группе сравнения было менее 5 наблюдений, использовали двусторонний точный критерий Фишера. Анализ связи (корреляции) нескольких признаков проводили, применяя непараметрический метод Спирмена. Различия считали статистически значимо достоверным при р < 0,05. Все расчеты проводили с помощью пакета программ STATISTICA 7.0 (Реброва О.Ю., 2006). |
Добавить документ в свой блог или на сайт
Похожие:
 | Совершенствование методов диагностики и эндодонтического лечения... Методические рекомендации предназначены для медицинских работников, оказывающих первичную медико-санитарную помощь: врачей стоматологического... | | Клинико-микробиологическое обосновние временного протезирования при... Учебно-методическое пособие предназначено аспирантам и соискателям ученых степеней по всем специальностям для сдачи кандидатского... |
| Оценка уровня саливации и состояния полости рта при патологии верхних... Работа выполнена в фгу «Центральный научно-исследовательский институт стоматологии и челюстно-лицевой хирургии Росмедтехнологий»... | | Молекулярно-генетические особенности структуры генов патогенности... Работа выполнена в Федеральном Государственном учреждении науки «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии... |
 | Реферат в номинации «Питание» на тему «Какой мёд полезнее?» С древнейших времён он известен как диетическое и целебное средство. Ещё Авиценна утверждал: «Если хочешь сохранить молодость, то... | | Усовершенствованный интегрированный подход к планированию и проведению... С этой точки зрения она представляет собой совокупность систематизированных знаний о закономерностях формирования и функционирования... |
| Лабораторная in vitro оценка влияния качества обработки корневых... Исполнитель: Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем машиноведения Российской академии наук | | Грант нш-197. 2008. 4 Роль организации и экспрессии генетического... Работа была основана на использовании обширных генетических коллекций кафедры генетики и селекции спбгу с использованием генетических,... |
| Вестник балтийской педагогической академии Доктор психол наук, проф. И. П. Волков; доктор мед наук, проф. Ю. А. Горяев, канд мед наук, доц. А. Н. Калягин, доктор мед наук,... | | Возрастные и гендерные различия клинического течения кардиоваскулярных... О предложениях Медведевской районной организации профсоюза работников народного образования и науки РФ по проекту |
| Комплексный клинико-лабораторный сравнительный анализ систем ротационных... Методическое пособие разработано кандидатами химических наук, доцентами кафедры общей и неорганической химии С. Н. Свирской и И.... | | Диагностика дистальной окклюзии, обусловленной аномалиями челюстных... Программа предназначена для преподавателей, ведущих данную дисциплину, учебных ассистентов и студентов направления подготовки для... |
| А. П. Гайдара кафедра мед подготовки и бжд Международная научно-практическая конференция «Актуальные вопросы современной педагогической науки» | | Медицинские учреждения Материалы и оборудование: ребусы по теме «Медицинские учреждения», предметы для игры «Аптека» мяч, карточки с названиями мед учреждений... |
| Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Под ред. О. Я. Боксера, д-ра мед наук, проф., акад. Рамтн, засл деятеля науки РФ | | «Семья и психическое здоровье» Общественный совет по вопросам психического здоровья Т. А. Солохина (составление, обобщение, анализ, общая редакция); канд мед наук Э. Г. Рытик; канд экон наук Л. С. Шевченко; канд мед... |
