Микробиология, вирусология микробиология полости рта
Скачать 4.26 Mb.
|
Вопросы для самоконтроля
Тема: Серодиагностика бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций. Реакции агглютинации. Цель: Разобрать механизм реакций агглютинации и освоить методики постановки реакций линейной и пассивной агглютинации. Мотивация: Знание механизмов и методик постановки реакций агглютинации необходимо для серологической диагностики бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций. Основные понятия, которые должны быть усвоены студентами в процессе изучения темы: иммунные реакции; титр антител; реакции агглютинации; О  сновные вопросы, разбираемые на занятии:
Диагностические критерии серодиагностики • Диагностический титр - величина титра антител в сыворотке крови к конкретному возбудителю, превышение которой расценивается как диагностический признак. • Нарастание титра антител - не менее чем 4х - кратное увеличение титра антител к данному возбудителю, наблюдающееся при исследовании парных сывороток (сывороток взятых у больного с интервалом 7-10 дней). Более достоверный критерий серодиагностики. Реакция агглютинации (РА) Принцип метода: При взаимодействии антител и корпускулярных антигенов (микробные или другие клетки) в растворе электролита происходит склеивание (агглютинация) антигенов. Ингредиенты: 1. Антитела - находятся в сыворотке обследуемого человека. Сыворотку разводят физиологическим раствором от 1:40 до 1:1600 2. Антигены - диагностикумы. Добавляют в каждое разведение.
 «+» феномен агглютинации - образование хлопьев. «-» феномен агглютинации - равномерная муть. Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА) Принцип метода: Реакция, в которой происходит склеивание эритроцитов с нагруженными на них антигенами (эритроцитарный диагностикум) или антителами (иммунодиагностикум) в присутствии электролита. Эритроциты в РНГА служат "укрупнителями" для придания молекулярным антигенам корпускулярности. Инградиенты: 1. Антитела - находятся в сыворотке обследуемого человека. Сыворотку разводят физиологическим раствором от 1:10 до 1:160 2. Антигены – эритроцитарный диагностикум. Добавляют в каждое разведение. 3. Электролит - 0,9% раствор NaCl.  «+» феномен РНГА - "зонтик"«-» феномен РНГА - "пуговка" ПРОТОКОЛЫ ЛАБОРАТОРНЫХ РАБОТ Реакция линейной агглютинации с одним антигеном Оснащение: 7 пробирок, диагностикум, физраствор, сыворотка больного в разведении 1/100, пипетки Схема постановки реакции
Выдержать в термостате при 37°С 2 часа, затем при комнатной температуре - 18 часов. Учет результатов: ++++ полная агглютинация, жидкость прозрачная, большой осадок +++ большой осадок, жидкость мутная ++ незначительней осадок, жидкость мутная + взвесь равномерно мутная, отсутствует осадок. Результат: . Вывод: При постановке реакции линейной агглютинации с___________________________антигеном титр антител в сыворотке больного составил__________________, что свидетельсьвует о ______________________________________________________________. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) Оснащение: Пластина для РПГА, эритроцитарный диагностикум, сыворотка больного в разведении 1/10, пипетки, физраствор. Схема постановки реакции
Реакция протекает при комнатной температуре. Учет реакции через 30-40 минут: ++++ осадок эритроцитов в виде зонтика +++ на фоне склеившихся эритроцитов кольцо из осадка ++ выраженная агглютинация и ясно видимый осадок эритроцитов + и - оценивается как сомнительный результат Результат: _____________________________________________________________________________ Вывод: При постановке реакции пассивной гемагглютинации с___________________________антигеном титр антител в сыворотке больного составил______________________________, что свидетельствует о ___________________________________________________________. Вопросы для самоконтроля
3. Использование реакций агглютинации Тема: Серодиагностика бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций. Реакция преципитации. Цель: Разобрать механизм реакций преципитации и освоить методики постановки реакций кольцепреципитации и осадочной реакции преципитации. М отивация: Знание механизмов и методик постановки реакций преципитации необходимо для серологической диагностики бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций.Основные понятия, которые должны быть усвоены студентами в процессе изучения темы: преципитины; преципитиногены; реакции преципитации; токсины; антитоксины; реакции флокуляции Основные вопросы, разбираемые на занятии:
ПРОТОКОЛЫ ЛАБОРАТОРНЫХ РАБОТ Реакция кольцепреципитации Оснащение: Набор микропробирок, физраствор, преципитирующая сыворотка, преципитиноген в разведении 1/1000, пипетки Схема постановки реакции
Наслоить каждое разведение преципитиногена на преципитирующую сыворотку в объеме 0,2 мл. Учет реакции производится в течение 10 минут после наслаивания антигена по образованию мутного кольца преципитата.
Вывод: При постановке реакции кольцепреципитации с___________________________ антигеном титр преципитиногена составил__________________. Осадочная реакция Кана. Оснащение: Пробирки, пипетки, физраствор, антиген Кана, исследуемая сыворотка. Схема постановки реакции В чистую сухую пробирку наливают I мл антигена, в другую -I мл физ.раствора, который затем вливают в антиген ( I пробирка ) и, не дожидаясь отекания последних капель, быстро переливают смесь из одной пробирки в другую 6-7 раз, приготовленный антиген оставляют при комнатной температуре на 5-10 минут. В чистую пробирку микропипеткой наливают 0,025 мл готового антигена, добавляют в него 0,15 мл испытуемой сыворотки. В контрольной пробирке к 0,025 мл антигена вместо сыворотки добавляют 0,15 мл физ.р-ра. Смеси в пробирках встряхивают в течение 3 мин., после чего каждую пробирку наливают по 0,5 мл физ.р-ра и производят учет результатов. Для этого пробирки слегка наклоняют и в тонком слое жидкости рассматривают появление хлопьев преципитата. Учет результатов: ++++ жидкость прозрачная, четко выраженный хлопьевидный осадок +++ жидкость слегка опалеецирует, четко выраженный хлопьевидный осадок ++ жидкость опалеецирует, видимый хлопьевидный осадок - при отрицательном результате жидкость в пробирке остается прозрачной или слегка опалесцирует. Результат: ________________________________________________________________ . Вывод: При постановке осадочной реакции с антигеном___________________________ реакция_____________________________________________________________________, что свидетельствует о_________________________________________________________. Вопросы для самоконтроля
Тема: Серодиагностика бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций. Реакции лизиса и фагоцитоза. Цель: Разобрать механизм реакций лизиса и фагоцитоза и освоить методику постановки реакции связывания комплемента. Мотивация: Знание механизмов и методик постановки реакций лизиса и фагоцитоза необходимо для серологической диагностики бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций. Основные понятия, которые должны быть усвоены студентами в процессе изучения темы: лизис; комплемент; фагоцитоз;Основные вопросы, разбираемые на занятии:
Реакция связывания комплемента (РСК) Принцип метода: Специфический комплекс АГ + АТ всегда адсорбирует на себе комплемент. Инградиенты: В РСК участвуют две системы: 1. Основная. Состоит из АГ и AT (один компонент известен, другой - нет). Если АГ соответствует AT, то образуется комплекс, который свяжет комплемент. Этот комплекс не виден. Об образовании его узнают при помощи 2й системы. 2. Индикаторная (гемолитическая) система. Состоит из эритроцитов барана (АГ) и соответствующей им гемолитической сыворотки (AT), т.е. это готовый иммунный комплекс "+" феномен РСК - отсутствие гемолиза (содержимое лунки мутное или на ее дне осадок эритроцитов "—" феномен РСК - гемолиз ("лаковая кровь", жидкость прозрачна) Определение фагоцитарного показателя Для постановки опыта к 0,2 мл цитратной крови добавляют 0,1мл 2 млрд. взвеси бактерий. После инкубации в термостате при 37°С в течение 30 минут взвесь встряхивают, готовят мазки крови и окрашивают по методу Романовского - Гимзе или метиленовой синью. При микроскопии материала в разных полях зрения подсчитывают не менее 50 лейкоцитов и общее количество микробов в них. Фагоцитарный показатель получается при делении общего количества микробов, поглощенных фагоцитами, на количество фагоцитирующих клеток. ПРИМЕР: в 50 лейкоцитах содержатся 184 бактерии фагоцитарный показатель = 184 /50 = 3,68 Методика постановки опсоно-фагоцитщой реакции. Определение опсонического индекса. Для определения опсонического индекса необходимо: 1- лейкоциты здорового человека или экспериментального животного 2 - взвесь бактерий, концентрацией 7-8 млрд. в I мл. 3 - исследуемая сыворотка, содержащая антитела к данному микробу. 4 - сыворотка здорового человека. Готовят две взвеси: I. 0,1 мл взвеси лейкоцитов + 0,1 мл взвеси бактерий + 0,2 мл иммунной сыворотки. 2. 0,1 мл взвеси лейкоцитов + 0,1 мл взвеси бактерий + 0,2 мл сыворотки здорового человека (контроль). Смеси инкубируют в течение 10 минут при 3'7°С, после чего готовят мазки, окрашивают по Романовского-Гимза или метиленовой синью. Подсчитывают фагоцитарный показатель в отношении опыта и контроля. Отношение фагоцитарного показателя в присутствии иммунной сыворотки к фагоцитарному показателю в присутствии нормальной сыворотки составляет опсонический индекс. ПРИМЕР: Фагоцитарный показатель иммунной сыворотки равен 40, нормальный - 10, опсонический индекс равен 40/10 = 4. ПРОТОКОЛ ЛАБОРАТОРНОЙ РАБОТЫ Реакция связывания комплимента Оснащение: Пробирки, пипетки, физраствор, исследуемая сыворотка, антиген, гемолитическая сыворотка, комплимент, эритроциты барана. Схема постановки РСК с одним антигеном
Инкубация в термостате в течение 1 часа.
Учет результата: ++++ полная задержка гемолиза (жидкость бесцветная, значительный осадок склеившихся эритроцитов). +++ ясная задержка гемолиза (жидкость слабо розового цвета, значительный осадок эритроцитов). ++ частичная задержка гемолиза (жидкость интенсивно окрашена, компактный осадок эритроцитов). + слабая задержка гемолиза (жидкость интенсивно окрашена, незначительный осадок). - полный гемолиз (" лаковая кровь", отсутствие осадка). Результат: 2 пробирка контроль антитела – _______________________________________ 3 пробирка контроль антигена - _________________________________________________ 1пробирка опытная - ___________________________________________________________ Вывод: При постановке реакции связывания комплемента с__________________________ антигеном ___________________________________________________________________. Вопросы для самоконтроля
Тема: Серодиагностика бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций. Современные методы иммунодиагностики. Цель: Ознакомиться с современными методами иммунодиагностики и освоить технику постановки иммуноферментного анализа. Закрепить знания по теме «Серодиагностика бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций». Мотивация: Знание механизма и методики постановки реакции иммуноферментного анализа необходимо для серологической диагностики бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций. Основные понятия, которые должны быть усвоены студентами в процессе изучения темы: радиоиммунный анализ; иммуноферментный анализОсновные вопросы, разбираемые на занятии:
Иммуно-ферментный анализ (ИФА) Принцип метода: Антитела к искомому антигену фиксируют на носителе (в лунках полистироловой панели). Вносят исследуемый материал, добавляют антитела, меченые ферментом и хромогенный субстрат. Все этапы разделяются интенсивной промывкой лунок. При соответствии АГ и AT жидкость в лунке по завершении реакции меняет цвет, причем интенсивность окрашивания пропорциональна количеству искомого компонента.  "+" феномен ИФА - появление окрашивания "—" феномен ИФА - отсутствие окрашивания ПРОТОКОЛ ЛАБОРАТОРНОЙ РАБОТЫ Оснащение: набор для постановки ИФА, исследуемая сыворотка. Схема постановки реакции 1 фаза постановки ИФА. Промывка пластины с антигеном фосфатно-солевым буфером по 0,2 мл (4 капли) в каждую лунку (0,1 – 2 капли).
Инкубация пластины в термостате при 370С в течение 30 минут. 2 фаза постановки ИФA. Промывка пластин троекратно фосфатно-солевым буфером по 0,2 мл в каждую лунку.
Инкубация пластин в термостате при 37°С в течение 30 минут. 3 фаза постановки ИФА. Промывка пластин троекратно фосфатно-солевым буфером по 0,2мл в каждую лунку.
Инкубация пластин в термостате при 370С в течение 10 минут.Во все лунки добавить по I капле серной кислоты (Н2 SO4). Учет результатов: Результат ИФА регистрируют с помощью спектрофотометра, измеряя оптическую плотность при длине волны 492нм. ИФА положителен, если показатель оптического поглощения исследуемой сыворотки превышает оптическую плотность критического. Оптическая плотность критического = 0,1 + оптическая плотность контрольного конъюгата. При визуальной регистрации реакции считают положительными, если имеются отчетливые различия в интенсивности окраски при реакции исследуемой сыворотки по сравнению с отрицательной контрольной сывороткой (появление интенсивно желтого окрашивания). Результат: 5-я лунка (контроль сыворотки отрицательный) - . 6-я лунка (контроль сыворотки положительный) - . 1-я лунка (контроль коньюгата) - . 2,3,4 лунки (опытные) - . Вывод: При постановке реакции ИФА с антигеном _________________________________ реакция_________________________,что свидетельствует о __________________________ Вопросы для самоконтроля
Основная литература 1.Воробьев А.А. Медицинская и санитарная микробиологиялогия: учеб. пособиен для студентов мед вузов/. А.А.Воробьев и др. – 4-е изд., стер.- М.:Академия, 2010.-461 с: ил. 2. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: учеб. для мед. вузов / А.И.Коротяев и др.- 4-е изд., испр. И доп..- СПб.: СпецЛит, 2008. – 767 с. 3. Медицинская микробиология/ под ред. Поздеева O.K. - М.:ГЭОТАР Медиа, 2006. – 765 с. Дополнительная литература 1. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии : учеб. для студентов мед. вузов / под ред. А.С.Быкова, А.А. Воробьева, В.В.Зверева - 2-е изд.- М. : «Миа», 2008. - 272 с. 2. Воробьев А.А., Кривошеин Ю.С., Широбоков В.П. Медицинская и санитарная микробиология: учебное пособие для студентов высших медицинских учебных заведении / А.А. Воробьев, Ю.С. Кривошеин, В.П. Широбоков – 2-е изд., М.: Академия, 2006. 3. Емцев В.Т., Мишустин Е.Н. Микробиология: учебник для вузов -5-е изд., перераб. и доп. - М.: Дрофа, 2005.- 442с. 4.Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. Под ред. Зверева В.В., Бойченко М.Н. Учебник в 2-х томах, М.: ГЭОТАР- Медиа, 2010. 5.«Определитель бактерий Берджи». Под ред. Хоулта Дж., Крича Н., Смита П. И др. В двух томах. М.: «Медицина», 1982. 6. «Внутрибольничные инфекции». Под редакцией Венцела Р.П. М.: «Медицина»,1990. 7. Кузнецов Е.А. с соавт. Микробная флора полости рта и ее роль в развитии патологических процессов. – М: «Медицина» -1996 г. 8. Боровский Е.В., Леонтьев В.К. Биология полости рта. – М: «Медицина». - 1991 г. Перечень вопросов и заданий для самостоятельной работы 1. По теме «Серодиагностика бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций заполнить в рабочей тетради разделы для самостоятельной работы: основные свойства антигенов; антигенная структура бактериальной клетки; антигенная структура вирусов; строение иммуноглобулинов; применение антигенов и антител (биопрепараты); реакция агглютинации; реакция пассивной гемагглютинации; реакция связывания комплемента; иммуно-ферментный анализ |
ыворотка больного 1/100
Похожие:
 | Пояснительная записка «Микробиология и вирусология» ... | | Микробиология, вирусология микробиология полости рта Структуры внутрибольничных инфекций, вызываемых условно-патогенными микробами и оппортунистами |
| Программа учебной дисциплины основы физиологии кожи и волос ... |  | Вопросы к экзамену для студентов специальности «Стоматология» по... Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования |
| Методические указания для обучающихся по дисциплине «Микробиология,... Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Красноярский государственный медицинский... | | Методические рекомендации по организации изучения дисциплины 62 Протокол... ... |
| Анализ современных представлений об иммунитете, аллергии с позиций... ... | | Рабочая программа учебной дисциплины одобрена Ученым советом лечебного факультета от «29» При разработке рабочей программы учебной дисциплины «микробиология, вирусология, микробиология полости рта» в основу положены |
| Департамент образования г. Москвы Западное окружное управление образования... ... | | Примерная программа наименование дисциплины микробиология, вирусология... Дисциплина «Микробиология, вирусология» относится к циклу математических, естественнонаучных дисциплин |
| Примерная программа наименование дисциплины микробиология, вирусология... Дисциплина «Микробиология, вирусология» относится к циклу математических, естественнонаучных дисциплин | | Примерная программа наименование дисциплины микробиология, вирусология... Дисциплина «Микробиология, вирусология» относится к циклу математических, естественнонаучных дисциплин |
| Учебно-методический комплекс по дисциплине Микробиология и вирусология (название) Учебно-методический комплекс Микробиология и вирусология составлен в соответствии с требованиями Государственного образовательного... | | Рабочая программа учебной дисциплины микробиология полости рта Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «российский государственный медицинский университет... |
| Рабочая программа дисциплины микробиология, вирусология Группа № | | Экзаменационные вопросы по микробиологии и вирусологии микрофлора... Медицинская микробиология. Предмет и задачи микробиологии. Этапы развития медицинской микробиологии. Работы Л. Пастера и Р. Коха... |
