;579. 23''315 вгк окп

Скачать 0.89 Mb.

Название	;579. 23''315 вгк окп
страница	4/10
Дата публикации	28.11.2014
Размер	0.89 Mb.
Тип	Отчет

100-bal.ru > Литература > Отчет

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

1.1.2. Выбор оптимального направления исследований

При разработке оптимальной стратегии исследования мы исходили из необходимости установления существования корреляции между часто встречаемой эпигенетической супрессией гена PDLIM4/RIL и своеобразным паттерном изменений транскрипции генов, который может обуславливать выявленные нами ранее характерные морфологические признаки клеток рака молочной железы. В результате исследования нам предстоит также разработать диагностический тест, который позволит определять в клинических образцах супрессию гена PDLIM4/RIL. Прежде чем проводить анализ клинических образцов мы считаем необходимым верифицировать данные и методики на панели линий клеток рака молочной железы, которые были ранее нами охарактеризованы в плане экспрессии гена PDLIM4/RIL и состояния сигнальных путей. Эти линии клеток также должны служить источником РНК для секвенирования по технологии NGS. Кроме этого необходимо провести анализ состояния гена PDLIM4/RIL на уровне ДНК чтобы исключить появление точечных мутаций в кодирующей области. Наконец, для верификации эпигенетического характера супрессии гена PDLIM4/RIL необходимо провести анализ метилирования этого гена на уровне ДНК и гистонов. Эти задачи были сформулированы как первоочередные и они стали задачами первого этапа. На втором этапе будет проведено изучение образцов опухолей рака молочной железы, полученных в клинике, с целью разработки теста и подтверждения выводов, полученных на культурах клеток.

1.2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Использованные реактивы

В работе были использованы следующие материалы и реактивы: трипсин сухой (Invitrogen), версен (Диа-М), глицерин («Sigms-Aldrich», США), набор для определения концентрации белка «Bio-Rad Protein Assay Kit» («Bio-Rad», США), фетальная бычья сыворотка (Invitrogen), пластиковая культуральная посуда («Nunk» Дания), криопробирки («Sigma», США), среды AmnioMAX (Invitrogen), среда DMEM/F12 (1:1) (Applichem), L-глутамин (Sigma-G5763), диметилсульфоксид («Amresco», США), соляная кислота, гидроксид натрия, спирт этиловый, ледяная уксусная кислота; реактивы производства «Sigma» (США): трипановый синий, агароза, Трис-HCl, ацетат натрия, бромистый этидий, трис-(гидроксиметил)аминометан (Трис), динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (Na2ЭДТА); ферменты и реактивы производства ЗАО «Медиген», Россия: РНК-зависимая ДНК-полимераза вируса мышиного миелобластоза Mo-MuLV, Taq ДНК-полимераза, дезоксинуклеозидтрифосфаты; набор РИБО-сорб, (производства ЗАО «Интерлабсервис», Россия) для выделения ДНК/РНК; набор Wizard SV Gel and PCR Clean-Up System производства «Promega» (США) для выделения продуктов амплификации из агарозного геля. Для определения нуклеотидной последовательности ДНК использовали наборы реагентов фирмы ABI.

Эритроциты человека для постановки реакции гемагглютинации получали от волантера – сотрудника лаборатории. Промывание эритроцитов и подготовку рабочей 1%-ной суспензии осуществляли с использованием 0,9%-ного раствора натрия хлорида (физиологический раствор).

Иммунная сыворотка овцы к вирусу Сендай, культивированному в клетках 4647, получена путем трехкратной иммунизации овцы породы Дорпер (Ферма Capri, Россия).

Растворы для культур клеток:

Фосфатно-солевой буферный раствор (PBS) содержит хлорид натрия (0.14M), фосфатный буфер (0.01M), хлорид калия (0.003M). Мы использовали PBS в таблетках (Invitrogen, USA), одну таблетку растворяли в 100мл дистиллированной воды и автоклавировали для стерилизации.

Раствор трипсина для пересева клеток готовится на PBS добавлением ЭДТА до 1мМ и трипсина до 0,05%. Сначала готовится раствор 1мМ ЭДТА в 1ХPBS, этот раствор автоклавирусется для стерилизации при 121°С, 45 мин. Затем добавляется соответствующее количество сухого трипсина и полученный раствор фильтруют через шприцевую насадку с диаметром пор 0,22 нм (стерильная фильтрация).

Раствор трипсина для подращивания вируса Сендай готовится на среде ДМЕМ добавлением сухого тирпсина до конечно концентрации 10 мг/мл (1000-кратный раствор штоковый), затем полученный раствор фильтруют через шприцевую насадку с диаметром пор 0,22 нм для стерилизации, расфасовывают в микропробирки по 100 мкл и хранят при -20°С до использования.

Для работы с культурами клеток использовали культуральный пластик фирмы Greiner, Германия.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Похожие:

$;579. 23\$	Вгк окп № госрегистрации Спектроскопия комбинационного рассеяния, которая позволяет изучать колебательные и вращательные состояния молекул гемопорфирина и...	$;579. 23\$	Вгк окп Ключевые слова: ускорители, ядерные реакции, структура атомных ядер, ионно-пучковые методы анализа материалов, детекторы, базы данных,...
$;579. 23\$	План внутришкольного контроля за учебно-воспитательным процессом Достижение соответствия функционирования и развития педагогического процесса в гбоу сош №315 требованиям государственного стандарта...	$;579. 23\$	8, 15, 22 апреля 2011 года с 17 до 20. 30 по адресу ул. Вавилова,... Вавилова, д. 7, ауд. 315 преподаватель Ляпунова Е. Э. принмает зачет с целью получения допуска к кандидатскому экзамену по английскому...
$;579. 23\$	Reinforced concrete piles. Specifications окп 58 1700 Дата введения... Внесены всесоюзным ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательским институтом гидротехники имени Б. Е. Веденеева	$;579. 23\$	Заседание молодежной организации «Мы вместе» Поддубская Екатерина Сергеевна, главный специалист спб гку «СПб дн», тел.: (812) 579-42-16
$;579. 23\$	Министерство здравоохранения СССР приказ от 21 июля 1988 года n 579... Тема №6 Роль и место тыловых госпиталей в современной системе лечебно-эвакуационных мероприятий	$;579. 23\$	Институт дополнительного профессионального образования центр переподготовки... Санкт-Петербург, ул. Большая Морская, 18, комн. 206, телефон/факс (812) 315-06-47
$;579. 23\$	Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Литература 6в: «Тарас Бульба» дочитать, ответить на вопросы после текста, с. 314-315	$;579. 23\$	• 176 км трасс (54 синих) (50 км), 105 красные (99 км), 17 черные (26 км) Вероны, 330 км от аэропорта Венеции, 315 км от аэропорта Милана, 110 км от аэропорта Инсбрук
$;579. 23\$	Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Проектная наполняемость 22 класса/комплекта, школа рассчитана на 450 человек в одну смену, в настоящее время обучается 579 учащихся,...	$;579. 23\$	Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Рабочая образовательная программа по русскому языку для 5 «Б» класса гбоу сош №315 составлена в соответствии с
$;579. 23\$	8-4 Давыдова М. Ю. Алгебра Макарычев: 444,445,484,486,485,526,550,549,551,572-579... Образовательные: способствовать обобщению и закреплению понятий о металлах главных и побочных подгрупп и их соединениях	$;579. 23\$	Рабочая программа По дисциплине «Общая и медицинская генетика» Для... По Государственному образовательному стандарту высшего профессионального образования 315 часов
$;579. 23\$	Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Краткая информация о педагогической части практики на 4 курсе (подробно см в программе педагогической практики, представленной в...	$;579. 23\$	Формирование и развитие рынка бытового обслуживания населения ( на примере Хабаровского края ) Защита состоится «17» мая 2012 года в 16-00 часов на заседании диссертационного совета д 212. 294. 03 при фгбоу впо «Тихоокеанский...

Школьные материалы