Молекулярно-генетическая природа первичных гемофагоцитарных лимфогистиоцитозов в россии

Скачать 347.9 Kb.

Название	Молекулярно-генетическая природа первичных гемофагоцитарных лимфогистиоцитозов в россии
страница	1/4
Дата публикации	03.04.2015
Размер	347.9 Kb.
Тип	Автореферат

100-bal.ru > Литература > Автореферат

1 2 3 4

На правах рукописи

Милованова Наталья Викторовна

молекулярно-генетическая природа ПЕРВИЧНЫХ ГЕМОФАГОЦИТАРНЫХ ЛИМФОГИСТИОЦИТОЗОВ В РОССИИ
03.02.07 – генетика

14.01.21 – гематология и переливание крови

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

МОСКВА, 2011

Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Медико-генетическом научном центре РАМН

Научные руководители:	доктор биологических наук, профессор Поляков Александр Владимирович кандидат медицинских наук Масчан Михаил Александрович
Официальные оппоненты:	доктор медицинских наук, профессор Журков Вячеслав Серафимович
	кандидат медицинских наук, Бронин Глеб Олегович
Ведущая организация:	ГОУ ВПО Российский государственный медицинский университет Росздрава (РГМУ)

Защита состоится « » 2011 г. в « » часов на заседании Диссертационного совета Д 001.016.01 при Учреждении Российской академии медицинских наук Медико-генетическом научном центре РАМН по адресу: 115478, Москва, ул. Москворечье, д. 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российской академии медицинских наук Медико-генетического научного центра РАМН по адресу: 115478, Москва, ул. Москворечье, д. 1.

Автореферат разослан « » 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Д 001.016.01

по защите докторских и кандидатских диссертаций,

доктор медицинских наук, профессор Зинченко Р.А.

Актуальность проблемы

Гемофагоцитарные лимфогистиоцитозы (HLH - Hemophagocytic lymphohistiocytosis) - группа иммунологических заболеваний, характеризующаяся неконтролируемой пролиферацией цитотоксических лимфоцитов и гистиоцитов со стремительным фатальным течением без специальной терапии. Основными клиническими симптомами HLH являются лихорадка, гепатоспленомегалия, поражение ЦНС. Основными лабораторными показателями являются би- или пан-цитопения, гипертриглицеридемия, гиперферритинемия, гипофибриногенемия. При гистологических исследованиях обнаруживают лимфогистиоцитарную инфильтрацию и гемофагоцитоз (Janka G. E.et al., 1983).

Выделяют две формы HLH: первичные (наследственные) и вторичные. Вторичные формы HLH ассоциированы с различными инфекциями, онкологическими, аутоиммунными и другими заболеваниями, они являются более частыми и встречаются как у детей, так и у взрослых и требуют иной тактики лечения, чем первичные HLH (Janka G.E. et al., 1998). В ряде случаев нельзя клинически различить первичные и вторичные формы HLH. В данных случаях только молекулярно-генетическое исследование дает возможность правильно поставить диагноз и выбрать тактику лечения пациента.

Семейный гемофагоцитарный лимфогистиоцитоз (FHL) и Х-сцепленный лимфопролиферативный синдром (XLP) являются разновидностями первичных HLH. По международным данным частота FHL, наиболее распространенной формы первичных HLH, составляет 1 на 50 000 новорожденных (Henter J. I. et al., 1991), а XLP - от 1 до 3 на 1 000 000 новорожденных мальчиков (Purtilo D. T.et al., 1991). Генетически выделяют пять форм FHL: FHL1 (ген неизвестен, локус 9q21.3-22), FHL2 (ген PRF1, локус 10q21-22), FHL3 (ген UNC13D , локус 17q25), FHL4 (ген STX11, локус 6q24.1) и FHL5 (ген STXBP2, локус 19p13.3-13.2). Наиболее частой генетической формой заболевания в мире является FHL2 (ген PRF1, мутации в котором ответственны за 20 - 50% случаев заболевания). Ген PRF1 кодирует белок перфорин, участвующий в образовании пор в мембране клетки-мишени. Белок Munc13-4 (ген UNC13D, мутации в котором выявляют у 20 - 25% FHL пациентов) отвечает за последние этапы связывания цитотоксической гранулы с мембраной NK-, CTL- клеток. Белки синтаксин (ген STX11, мутации обнаруживают у 10 -20 % FHL пациентов) и Munc18-2 (ген STXBP2) тесно взаимодействуют друг с другом и регулируют экзоцитоз цитотоксических гранул (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=gene&part=hlh#hlh.Summary).

XLP– редкий первичный иммунодефицит, характеризующийся патологической реакцией организма на инфицирование вирусом Эпштейна-Барр (EBV). EBV вызывает развитие фульминантного инфекционного мононуклеоза, приводящего к HLH. В настоящее время известно две генетические формы заболевания, XLP1 – ген SH2D1A и XLP2 - ген BIRC4. Ген SH2D1A кодирует белок SAP, ответственный за передачу сигнала активации цитотоксического лимфоцита, за созревание NKT-клеток, за последние этапы дифференцировки В-клеток и Т-клеточный гомеостаз. Ген BIRC4 кодирует Х-сцепленный ингибитор апоптоза . По литературным данным мутации в гене SH2D1A находят у 16-60% , а в гене BIRC4 у 20% XLP пациентов (Filipovich A. H. et al., 2010).

Лечение FHL и XLP больных обычно проводится по протоколу HS2004 с последующим обязательным проведением трансплантации костного мозга (ТКМ). Без специального лечения и ТКМ эти заболевания являются летальными.

И FHL, и XLP являются генетически гетерогенными заболеваниями, и лишь молекулярно-генетическое исследование может определить генетическую форму болезни. До настоящего времени в России не была определена частота распространенности различных генетических форм FHL, не изучен спектр мутаций, приводящих к этому заболеванию, не разработан алгоритм молекулярно-генетического обследования таких пациентов.

Цель исследования:

Исследование молекулярно-генетической природы первичных гемофагоцитарных лимфогистиоцитозов в группах российский больных.

Задачи исследования

В группе российских FHL пациентов исследовать кодирующие последовательности генов PRF1, UNC13D, STX11 и STXBP1, ответственных за развитие FHL, а также генов SH2D1A и BIRC4, ответственных за развитие XLP, включая прилегающие области экзон-интронных соединений. Изучить частоты встречаемости различных генетических форм FHL, определить спектр мутаций, определяющих развитие этого заболевания среди российских больных.
В группе российских XLP пациентов провести исследование кодирующих последовательностей генов SH2D1A и BIRC4, ответственных за развитие этого заболевания, включая прилегающие области экзон-интронных соединений. Определить частоты встречаемости двух основных генетических форм заболевания (XLP1 и XLP2).
Для наиболее часто встречающихся мутаций определить причины их распространенности в исследуемой выборке, разработать эффективные методы диагностики. Исследовать корреляцию генотип-фенотип и прогностическое значение наиболее распространенных генетических форм.
На основании полученных результатов разработать оптимальный алгоритм молекулярно-генетической диагностики первичных гистиоцитозов среди российских больных.

Научная новизна

Впервые в России проведено молекулярно-генетическое обследование российских FHL и XLP пациентов. Определен спектр мутаций в генах PRF1, UNC13D, STX11, STXBP2, SH2D1A и BIRC4, определяющих развитие этих заболеваний у российских FHL и XLP пациентов.

Проведен анализ частоты встречаемости различных генетических форм FHL в группе российских больных. Впервые разработан алгоритм молекулярно-генетического анализа российских FHL пациентов.

Впервые в России проведен анализ причин высокой доли отдельных мутаций в исследуемой выборке. Показано влияние эффекта основателя на распространение этих мутаций в России.

Исследована корреляция генотип-фенотип для наиболее распространенной генетической формы - FHL3 и выполнена оценка влияния генетической формы заболевания на результаты терапии.

Разработан быстрый, простой и недорогой способ одновременного выявления трех наиболее частых мутаций в гене UNC13D с помощью мультиплексной полимеразной цепной реакции.

Проведено молекулярно-генетическое исследование группы российских пациентов с клиническим диагнозом ХLP (Х-сцепленный лимфопролиферативный синдром). Изучен спектр мутаций, приводящих к развитию этого заболевания.

Практическая значимость

Разработанная методика проведения молекулярно-генетического анализа FHL и XLP может быть использована для подтверждающей, дифференциальной, пресимптоматической и пренатальной диагностики этих заболеваний.

Сочетание методов клинической и молекулярно-генетической диагностики поможет врачам в выборе тактики лечения таких больных, в частности в решении вопроса о целесообразности проведения ТКМ для каждого конкретного больного.

Своевременная молекулярно-генетическая верификация диагноза позволяет ускорить планирование и реализацию программной химиотерапии и трансплантации гемопоэтических стволовых клеток, и, таким образом, увеличивает вероятность излечения пациентов с FHL.

Использование разработанного алгоритма молекулярно-генетического обследования российских больных поможет сделать проведение данной диагностики более эффективной, быстрой и менее дорогостоящей.

Положения, выносимые на защиту

Разработана методика молекулярно-генетического обследования российских FHL и XLP пациентов.
Определен спектр мутаций, приводящих к развитию заболевания в группе российских FHL пациентов.
Определен спектр мутаций, приводящих к развитию XLP в группе российских пациентов.
Наиболее частой генетической формой FHL в исследованной группе российских FHL пациентов является FHL3, обусловленная мутациями в гене UNC13D.
Причиной высокой частоты FHL3 в России является распространение в популяции отдельных мутаций в результате эффекта основателя.
Разработанный алгоритм молекулярно-генетического обследования российских FHL пациентов увеличит эффективность и ускорит проведение анализа.

Апробация работы

Материалы диссертации представлены на следующих конференциях: Ежегодные конференции Европейского общества генетики человека (ESHG) в 2008 году (г. Барселона, Испания), 2009 году (г. Вена, Австрия), 2010 году (г. Гетеборг, Австрия)- стендовое сообщение; 24-я Ежегодная конференция международного общества гистиоцитологов в 2008 году (г. Берлин, Германия) – доклад; VI симпозиум «Биологические основы терапии онкологических и гематологических заболеваний» в январе 2009 года (г. Москва) – доклад; 25-я Ежегодная конференция международного общества гистиоцитологов в 2009 году (г. Бильбао, Испания) – стендовое сообщение; XI Всероссийский научный форум с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» в 2009 году (г. Санкт-Петербург) – доклад; Международная научно-практическая конференция «Актуальные вопросы первичных иммунодефицитов» в 2009 году (г. Минск, Беларусь)- доклад; VI съезд Российского общества медицинских генетиков в 2010 году (г. Ростов) – доклад

Личный вклад автора в проведение исследования

Автор лично принимал участие в анализе отечественной и зарубежной литературы по теме диссертации, планировании экспериментов и получении основной части результатов. Автор самостоятельно осуществлял выделение и анализ ДНК из образцов крови пациентов, проводил поиск мутаций в исследуемых генах методом прямого автоматического секвенирования, самостоятельно анализировал все полученные результаты.

Публикации

Результаты диссертационной работы отражены в 10 печатных работах. Из них 3 статьи опубликованы в рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК МОН РФ.

Внедрение результатов работы

Результаты исследований и практические рекомендации внедрены в работу МГНЦ РАМН.

Объем и структура работы

Диссертация изложена на 104 страницах машинописного текста состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, списка использованной литературы. Библиография содержит 72 источника, из них 3 отечественных и 69 зарубежных. Диссертация иллюстрирована 13 таблицами и 19 рисунками.