Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № п 716 от 12 августа 2009 г. Исполнитель: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кабардино-Балкарский государственный университет им. Х. М. Бербекова»

2.5 Количественное определение белка в бесклеточных тест-структурах Для расчета удельных активностей ОДК и аминоксидаз, выраженных в нанокаталах на миллиграмм белка, проводилось определение концентрации белка в каждой пробе ткани как гепатомы Г-27, так и регенерирующей печени. Определение проводилось по методу Lowry (1951) [197] в модификации С. П.Сяткина [22]. Порядок проведения определения белка представлен в таблице 10. Таблица 10 - Порядок проведения определения концентрации белка в биологических пробах. Инкубационная смесь Опыт Контроль буфер 0,1 - NaOH (1N) 0,8 0,8 ДОХ (1%) 0,1 0,1 р-в С 4 4 проба 0,1 - Встряхнуть до просветления р-в D 0,5 0,5 Перемешать Термостатирование при 370ºС 30 мин. Спектрофотометрирование λ=750 нм В связи с высоким содержанием липо- и гликопротеинов в ткани метод пределения белка по Лоури модифицировали следующим образом. Применили дезоксихолат. Это сократило время анализа и исключило потерю белка, входящего в состав липо- и гликопротеинов. Для более полного растворения белка концентрацию NaOH увеличили с 0,1 М до 1 М. Заменили тартрат нацитрат натрия. Стабильность реактива С повышали тем, что реактив А готовили на воде, а не на 0.1 М NaOH. Оптимальным соотношение концентраций детергента и белка в пробе было 1:100. Калибровочная зависимость сохраняла линейный характер до концентрации 250 мкг/мл белка в пробе. Полученная оптическая плотность растворов сравнивалась с таковой для стандартных растворов с известной концентрацией белка и по калибровочной кривой (рисунок 24) рассчитывалась концентрация белка в анализируемой пробе. Рисунок 24 - Калибровочная кривая для расчета концентрации белка. По оси абсцисс – концентрация белка в растворе (в мкг/мл); по оси ординат – оптическая плотность раствора, измеряемая при 750 нм. Глава 3 Исследование биохимических свойств гетероциклических веществ оригинального синтеза на бесклеточном уровне 3.1. Тест-система из регенерирующей печени крыс Количественная оценка влияния синтетических аналогов ПА из исследуемых групп на обмен ПА в бесклеточной тест-системе из регенерирующей печени крыс определялась по характеру и величине их действия на активность аминоксидаз – ПАО и ДАО. Полученные экспериментальные данные представлены на рисунках 25-26. Рисунок 25 - Влияние производных бензимидазола и азафлуорена (группа А) на скорость окислительного дезаминирования Пут, Сд и См в бесклеточной тест-системе из регенерирующей печени крыс (результаты представлены в виде M±m для 9 измерений). Рисунок 26 - Влияние производных анилина (группа Б) на скорость окислительного дезаминирования Пут, Сд и См в бесклеточной тест-системе из регенерирующей печени крыс (результаты представлены в виде M± m для 9 измерений). Рисунок 27 - Влияние производных диоксаборенинопиридина (группа В) на скорость окислительного дезаминирования Пут, Сд и См в бесклеточной тест-системе из регенерирующей печени крыс (результаты представлены в виде M± m для 9 проб). Полученные результаты (рисунок 27) свидетельствуют о том, что все исследованные вещества группы А, кроме 1А, существенно увеличивают распад См. Окисление Пут ускоряют соединения 3А, 10А и 12А, а Сд – 4А, 7А, 9А и 10А. Как видно из диаграммы (рисунок 28), все протестированные соединения группы Б вызывали статистически достоверные изменения в скорости окислительного дезаминирования ПА. Вещество 9Б ингибировало дезаминирование Сд, а вещество 11Б – Пут и См. Это позволяет прогнозировать у них канцерогенные свойства. Все остальные вещества проявили канцеростатические свойства, активируя процесс окислительного дезаминирования. Довольно резкая активация См наблюдалась при действии вещества 5Б. Наибольшее активирующее действие на окислительный распад всех трех ПА оказало вещество 3Б. Все тестируемые вещества группы В также вызывали статистически достоверные изменения активностей ДАО и ПАО (рисунок 27). Процесс окислительного дезаминирования Пут значительно ингибировался всеми тестируемыми веществами этой группы. Скорость окислительного дезаминирования Сд уменьшалась в 2 раза, См – уменьшалась незначительно или оставался неизменным (при действии СоА2 и СоА3). Это позволило предположить наличие у всех исследуемых веществ данной группы канцерогенных свойств. Влияние тестируемых веществ из группы А на обмен ПА в ткани регенерирующей печени оценивалось по характеру и силе их действия на скорость синтеза ПА. Результаты этой серии опытов представлены в таблице 5 и рисунок 28. Следует отметить, что все исследованные вещества проявили ингибирующее действие на активность ОДК. Самыми активными оказались вещества 1А, 3А, 8А и 10А. Уровни ПА рассматривали как интегральные показатели изменения баланса скорости распада и синтеза ПА под влиянием тестируемых веществ. Результаты представлены на рисунке 29. Таблица 11 - Влияние производных бензимидазола и азафлуорена (группа А) на активность ОДК в бесклеточной тест-системе из регенерирующей печени крыс. Вещество Активность ОДК, нкат/мг белка Ингибирование, % Контроль 12,96±0,07 0 1А 6,32± 0,05 51,23 2А 7,25±0,08* 67,13 44,06 3А 4,26±0,06* 67,13 4А 8,33±0,07* 35,73 5А 9,23±0,05* 28,78 6А 10,98±0,07* 15,28 7А 8,00±0,06* 38,27 8А 3,61±0,08* 72,14 9А 5,02±0,06* 61,26 10А 2,18±0,06* 83,18 11А 10,00 ±0,08* 22,84 12А 7,56±0,06* 41,67 Примечание - Результаты представлены в виде M± m для 9 проб. *Статистически достоверные отличия от контроля, P<0,05. Рисунок 28 - Влияние производных бензимидазола и азафлуорена (группа А) на активность ОДК в бесклеточной тест-системе из регенерирующей печени крыс. Рисунок 29 - Влияние производных бензимидазола и азафлуорена (группа А) на уровни ПА в бесклеточной тест-системе из регенерирующей печени крыс (результаты представлены в виде M± m для 9 проб). Все исследованные соединения вызывали снижение уровней Пут и ПА. Наиболее эффективными оказались 3А, 8А и 10А.

Похожие:

	Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № П710 от 12... Исполнитель: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кабардино-Балкарский государственный...		Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № П869 от 18... Исполнитель: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кабардино-Балкарский государственный...
	Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № П1084 от... Исполнитель: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кабардино-Балкарский государственный...		Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта № П1676 от... Исполнитель: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кабардино-Балкарский государственный...
	Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта №14. 740. 11.... Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кабардино-Балкарский государственный университет...		Отчет о выполнении 2 этапа Государственного контракта № П782 от 24... Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кабардино-Балкарский государственный университет...
	Отчет о выполнении 2 этапа Государственного контракта № П371 от 07... Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кабардино-Балкарский государственный университет...		Отчет о выполнении 2 этапа Государственного контракта №16. 740. 11.... Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кабардино-Балкарский государственный университет...
	Отчет о выполнении 4 этапа Государственного контракта №14. 740. 11.... О выполнении 4 этапа Государственного контракта №14. 740. 11. 1071 от 24. 05. 2011 г		Отчет о выполнении 2 этапа Государственного контракта №14. 740. 11.... «Московский государственный университет экономики, статистики и информатики (мэси)»
	Отчет о проделанной работе Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кабардино-Балкарский государственный...		Программа (мероприятие): Федеральная целевая программа «Научные и... Исполнитель: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Кабардино-Балкарский государственный...
	Программа (мероприятие): Федеральная целевая программа «Научные и... Исполнитель: федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кабардино-Балкарский...		Отчет о выполнении 1 этапа Государственного контракта №16. 740. 11.... Программа (мероприятие): Федеральная целевая программа «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013...
	Отчет по исполнению I этапа Государственного контракта №05. 043.... Исполнитель (Поставщик): Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования города Москвы...		Отчет по исполнению I этапа Государственного контракта №05. 043.... Исполнитель (Поставщик): Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования города Москвы...