Этиологическая структура сальмонеллеза и эшерихиоза птиц 06. 02. 02 Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

На правах рукописи ПЛИТОВ ИВАН СЕРГЕЕВИЧ ЭТИОЛОГИЧЕСКАЯ СТРУКТУРА САЛЬМОНЕЛЛЕЗА И ЭШЕРИХИОЗА ПТИЦ 06.02.02 – Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук МОСКВА 2012 Работа выполнена на кафедре «Инфекционные и паразитарные болезни» ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств» (ФГБОУ ВПО «МГУПП»), Министерства образования и науки РФ. Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор Ленченко Екатерина Михайловна ФГБОУ ВПО «МГУПП» Официальные оппоненты: Степаненко Петр Петрович доктор ветеринарных наук, профессор кафедры Микробиологии и иммунологии ФГБОУ ВПО «МГУПП» Пирожков Михаил Константинович доктор ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник лаборатории качества и стандартизации лекарственных средств против бактерийных болезней животных ФГБУ «ВГНКИ» Ведущая организация: Государственное научное учреждение «Научно-исследовательский институт птицеперерабатывающей промышленности» Россельхозакадемии РФ (ГНУ НИИПП) Защита состоится « » 2012 г. в « » часов на диссертационного совета Д 212.148.09 при ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств» (109316, Москва, ул. Талалихина, 33). С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств». Автореферат разослан 2012 г. Автореферат размещен на сайте Министерства образования и науки РФ 2012 г. Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук, доцент И. М. Нитяга 1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. В структуре инфекционной патологии птиц по статистическим данным более 60,0 % составляют болезни бактериальной этиологии, из числа которых в период 2007-2011 гг. массовая доля сальмонеллеза составила 11,7 %, эшерихиоза – 63,0 % (Венгеренко Л. А., 2009, 2011; Фисинин В. И., 2007, 2011). В этиологии сальмонеллеза птиц участвуют микроорганизмы S. typhimurium и S. enteritidis, а также S. gallinarum и S. pullorum, вызывающие пуллороз птиц отряда Куриные. Этиологическая структура эшерихиоза наиболее часто представлена серогруппами О1, О2, О26, О55, О78, О138 (Бессарабов Б. Ф., 1980, 2007; Кожемяка Н. В., 1982, 2008; Грошева Г. А., 1983; Стрельников А. П., 1987; Радчук Н. А., 1990; Гусев А. А. и соавт., 1992; Козак С. С., 1992, 2011; Тугаринов О. А., 1993; Сидоров М. А. и соавт. 1995; Панин А. Н. и соавт., 1995; Ленев С. В., 1996; Шустер Б. Ю., 1996; Субботин В. В., 1997; Куликовский А. В., 1998, 2011; Малик Н. И. и соавт., 1998; Яременко Н. А., 1998; Каврук Л. С. и соавт., 1999; Пирожков М. К., 1999, 2002; Степаненко П. П., 1999; Виноходов В. О., 2000; Ленченко Е. М., 2000, 2011; Капустин А. В., 2001; Степаненко И. П., 2001; Венгеренко Л. А., 2003; Андреева Н. Л. и соавт., 2004; Бовкун Г. Ф., 2004; Салаутин В. В., 2004; Борисенкова А. Н. и соавт., 2004; Светоч Э. А., 2004; Крупальник В. Л., 2005; Скородумов Д. И. и соавт., 2005; Гусев В. В., 2006; Павлова И. Б., 2007; Галазин Н. М. и соавт., 2007; Рождественская Т. Н., 2009, 2011; Кононенко А. Б. и соавт, 2011; Смирнов Д. Д., 2011; Eickhoff T. C., 1981; M. D. Galvez A., 1989; Collins, 2001; Janice Y. C., 2011). Установлено, что при болезнях бактериальной этиологии в биотопе желудочно-кишечного тракта диких и синантропных птиц преобладают микроорганизмы родов Salmonella, Escherichia, Staphylococcus, Streptococcus, Pasteurella (Белоусова Р. В., 1977; Сюрин В. Н., 1979; Бессарабов Б. Ф., 2005, Багрецова А. Л., 2005; Бондарев А. Ю., 2009). Циркулирующие среди поголовья птицы микроорганизмы характеризуются устойчивостью к химиотерапевтическим препаратам, в частности, установлена устойчивость энтеробактерий к антибиотикам тетрациклинового ряда, природным и полусинтетическим пенициллинам (Пилипейко В. Г. и соавт., 2002; Хиштова Н. С., 2008; Шурахова Ю. Н. и соавт., 2011). При проведении мониторинговых исследований распространенности сальмонеллеза и эшерихиоза птиц целесообразным представляется применение эффективных методов индикации, оценки антагонистической активности, чувствительности к антибиотикам и дезинфицирующим средствам патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, циркулирующих среди поголовья птицы при массовых желудочно-кишечных болезнях, что и определило актуальность темы диссертационной работы. Цель исследований: изучить этиологическую структуру сальмонеллеза и эшерихиоза птиц с применением эффективных диагностических питательных сред и тест-систем для индикации и идентификации таксономически сходных видов энтеробактерий. Задачи исследований: - провести ретроспективный анализ данных по распространенности инфекционных болезней птиц бактериальной этиологии; - изучить ростообеспечивающие и ингибирующие свойства дифференциально-диагностических питательных сред и чувствительность иммунохроматографической тест-системы «Singlepath ® Salmonella» для индикации и идентификации микроорганизмов; - изучить эффективность схем бактериологического исследования на наличие микроорганизмов рода Salmonella и Escherichia; - изучить количественный и видовой состав микроорганизмов в микробиоценозах кишечника птиц; - изучить видовой состав патогенных и условно-патогенных энтеробактерий, выделенных из патологоанатомического материала птиц; - изучить этиологическую структуру сальмонеллеза и эшерихиоза птиц; - изучить антагонистическую активность, чувствительность к антибиотикам, устойчивость к дезинфицирующим средствам выделенных изолятов энтеробактерий Научная новизна. Установлено, что при желудочно-кишечных болезнях птицы в микробиоценозе желудочно-кишечного тракта доминируют культуры микроорганизмов, отнесенные к видам: Escherichia coli – 41,2 %; Salmonella typhimurium – 12,8 %; Salmonella enteritidis – 10,7 %; Proteus vulgaris – 7,0 %. Установлено, что этиологическая структура сальмонеллеза представлена видами – S. enteritidis (45,8 %), S. typhimurium (54,2 %); эшерихиоза, серогруппами – О2 (32,14 %), О15 (25,0 %), О1 (21,43 %), О78 (21,43 %), соответственно. При определении адгезивных антигенов установлено, что из 9 изолятов E. coli, отнесенных к серогруппе О2, адгезивными свойствами обладали 4 изолята (K99, 987P, F41, A20); из 7 изолятов, отнесенных к серогруппе О15, – 4 изолята (K99, A20); из 6 изолятов, отнесенных к серогруппе О1, – 3 изолята (A20); из 6 изолятов, отнесенных к серогруппе О78, – 4 изолята (K88, A20). С применением модифицированного метода изучения антагонистической активности бактерий установлено, что биологически активные вещества, продуцируемые изолятами E. coli, угнетают рост бактерий S. typhimurium с зоной задержки роста 1,4±0,1 мм; S. enteritidis – 1,6±0,1 мм; C. freundii – 1,5±0,2 мм; P. mirabilis – 0,6±0,1 мм; K. pneumonia – 1,3±0,1 мм. Из изолятов энтеробактерий, выделенных при желудочно-кишечных болезнях птиц, 21,4 % штаммов были чувствительны к антибиотикам группы цефалоспоринов (цефазолин, цефатоксим); 19,1 % – фторхинолонов (офлоксацин, ципрофлоксацин); 16,7 % – аминогликозидов (канамицин, амикацин). Среди изолятов энтеробактерий выделены штаммы, устойчивые к антибиотикам группы макролидов (эритромицин, олеандомицин) и природных пенициллинов (оксациллин), – 21,4 % соответственно. Практическая значимость работы. На основании экспериментальных данных по изучению межпопуляционных взаимодействий таксономически сходных видов энтеробактерий модифицирована методика определения антагонистической активности микроорганизмов и разработаны «Методические рекомендации по определению антагонистической активности микроорганизмов», утвержденные секцией «Ветеринарная санитария, гигиена и экология» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 8 от 22 июня 2010 года). Результаты исследований используются в учебном процессе на ветеринарно-санитарном факультете ФГБОУ ВПО «МГУПП» по дисциплине «Эпизоотология». Апробация материалов диссертации. Основные результаты диссертационной работы доложены и одобрены на заседаниях кафедры «Инфекционные и паразитарные болезни» МГУПБ (М., 2008-2011); на Международной научной конференции молодых ученых «Экологически безопасные ресурсосберегающие технологии и переработки сельскохозяйственного сырья и производства продуктов питания» (М., 2009); на VI Международном ветеринарном конгрессе по птицеводству (М., 2010). Основные положения, выносимые на защиту: • результаты ретроспективного анализа данных по распространенности инфекционных болезней птиц бактериальной этиологии; • количественный и видовой состав энтеробактерий, доминирующих в микробиоценозах кишечника при желудочно-кишечных болезнях птиц; • этиологическая структура сальмонеллеза и эшерихиоза птиц; • антагонистическая активность, чувствительность к антибиотикам, устойчивость к дезинфицирующим средствам выделенных изолятов энтеробактерий Публикация результатов исследований. По материалам диссертационной работы опубликовано 6 научных статей, в том числе 4 в журналах, рекомендованных ВАК РФ. Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, обсуждения результатов, выводов, библиографии, приложения. Работа изложена на 142 страницах компьютерного текста, содержит 16 таблиц, 18 рисунков. Библиографический список включает 171 источник, из них 51 иностранных авторов. 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Работа выполнена с 2008 по 2011 гг. на кафедре «Инфекционные и паразитарные болезни» ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств». Часть исследований проводилась в отделе диагностики бактериальных болезней ФГБУ «ЦНМВЛ». В опытах были использованы паспортизированные штаммы: Salmonella typhimurium № 5715; Salmonella enteritidis № 204; Escherichia coli О2, № 388; Escherichia coli О78:К80, № 320; Escherichia coli О138:К81, № 723; Klebsiella pneumonia № 24; Staphylococcus aureus № 123; Proteus vulgaris Н2091, полученные из коллекции ФГБУ ВГНКИ, Государственного НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л. А. Тарасевича. Изучение ростообеспечивающих, дифференциальных и ингибирующих свойств питательных сред проводили в соответствии с «Рекомендациями по организации и проведению контроля качества питательных сред для ветеринарных лабораторий» (М., 2011). При учете количественного состава энтеробактерий в микробиоценозах кишечника цыплят учитывали КОЕ микроорганизмов (lg/г) в определенном объеме (0,1 мл) разведения feces (Эпштейн-Литвак Р. В., 1969; Субботин В. В., 1999). С целью выделения возбудителей сальмонеллеза и эшерихиоза исследования проводили в соответствии с методическими указаниями: «Лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды» (М., 1990); «Методические указания по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных» (М., 2000). Для оценки этиологической значимости патогенных и условно-патогенных энтеробактерий при желудочно-кишечных болезнях исследования проводили в соответствии с «Методическими указаниями по бактериологической диагностике смешанной кишечной инфекции молодняка животных, вызываемой патогенными энтеробактериями» (М., 1999). Пробы пищевых продуктов для бактериологических исследований отбирали в количествах, предусмотренных нормативными документами: ГОСТ 26668-85 (СТСЭВ 3013-81) «Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологического анализа»; ГОСТ 7269-79 «Мясо. Методы отбора образцов и органолептические методы определения свежести»; СанПиН 2.3.2.560-96 и 2.3.2.1078-01 «Гигиенические требования к качеству и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов»; ГОСТ 10444.15-94 «Продукты пищевые. Методы определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов»; ГОСТ 30519-97 (ГОСТ Р 50474-93) «Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)»; ГОСТ 30519-97 (ГОСТ Р 50480-93) «Продукты пищевые. Методы выявления бактерий рода Salmonella». Идентификацию выделенных культур проводили в соответствии с классификационной системой «Bergy´ s manual…1984-1989». Биологические свойства микроорганизмов изучали, используя общепринятые методы (Герхардт Ф. и соавт., 1984; Сидоров М.А. и соавт., 1995; Скородумов Д.И. и соавт., 2005). В экспериментах использовали иммунохроматографическую тест-систему «Singlepath ® Salmonella» («Merck», Германия), латекс-агглютинационный экспресс-тест «Salmonella latex kit» («Oxoid», Англия), питательные среды «ВСА», «Эндо» («Hi-media», Индия), «Rambach agar», «XLT-4 agar», «Cromocult Coliform agar» («Merck», Германия). Биохимические свойства микроорганизмов изучали с использованием сред Гисса и множественной тест-системы «API» («BioMérieux», Франция). Серогрупповую принадлежность сальмонелл определяли в реакции агглютинации на стекле с диагностическими сыворотками (ФГУП «Курская биофабрика»), в соответствии с рекомендациями, изложенными в «Наставлениях по применению наборов сывороток сальмонеллезных О-комплексных и монорецепторных О- и Н-агглютинирующих для идентификации сальмонелл в РА на стекле» (М., 1997). Серогрупповую принадлежность эшерихий определяли в реакции агглютинации с диагностическими сыворотками (ФГУП «Армавирская биофабрика»), в соответствии с рекомендациями, изложенными в «Наставлении по применению агглютинирующих О-коли сывороток» (М., 1998). Для определения адгезивных антигенов эшерихий использовали агглютинирующие сыворотки К88, К99, 987Р, F41, А20 любезно предоставленные профессором Эдуардом Арсеньевичем Светочем (ФБУН ГНЦ прикладной микробиологии). Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам изучали методами серийных разведений, диффузии в агар (Навашин С. М., Фомина И. П., 1982), с использованием микробиологического анализатора «MicroTax». Антагонистические свойства микроорганизмов изучали общепринятыми методами (Егоров Н. С., 1979; Степаненко П. П., 1999) и с применением мембранных фильтров (Павлова И. Б., Ленченко Е. М., 1997). Исследования по устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам проводили в соответствии с методическими указаниями «О порядке испытания новых дезинфицирующих средств для ветеринарной практики» (М., 1987), «Проведение дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора» (М., 2002). Полученные данные обрабатывали методом вариационной статистики с использованием методического руководства «Теория статистики» и программы «Statgraphics» (Шмойлова Р. А., 2006). Выражаем благодарность д-ру биол. наук, проф. Павловой И. Б. (ВНИИВСГЭ) за оказание консультативной помощи при выполнении опытов по оценке антагонистической активности микроорганизмов, д-ру вет. наук Белоусову В. И. (ФГБУ «ЦНМВЛ») за оказание консультативной помощи при проведении ретроспективного анализа данных статистической отчетности по бактериальным болезням птиц.

Похожие:

	Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология... Рекомендации разработаны авторским коллективом сотрудников фгу «фцтрб-вниви» и Главного управления ветеринарии км рт		Лечебная и профилактическая эффективность сахаптина при ассоциированных... Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
	ОД. А 03 Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология,... Сагакянц Александр Борисович, кандидат биологических наук, доцент кафедры биохимии и микробиологии биолого-почвенного факультета...		Пояснительная записка «Микробиология и вирусология» ...
	Рабочая программа дисциплины «Ветеринарная микробиология и иммунология»		Рабочая программа дисциплины «Ветеринарная микробиология и микология» Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования
	«Микробиология, вирусология, иммунология» Национальный государственный Университетфизической культуры, спорта и здоровья имени П. Ф. Лесгафта		Примерная программа наименование дисциплины микробиология, вирусология... Дисциплина «Микробиология, вирусология» относится к циклу математических, естественнонаучных дисциплин
	Примерная программа наименование дисциплины микробиология, вирусология... Дисциплина «Микробиология, вирусология» относится к циклу математических, естественнонаучных дисциплин		Примерная программа наименование дисциплины микробиология, вирусология... Дисциплина «Микробиология, вирусология» относится к циклу математических, естественнонаучных дисциплин
	Микробиология, вирусология, иммунология ...		Аннотация рабочей программы дисциплины «Ветеринарная микробиология и микология» «Математический и естественнонаучный цикл» (С2Б11), его вариативная часть связана с такими дисциплинами как неорганической, аналитической...
	Биология наука о жизни Система понятий и терминов урока: биология, биосфера, экология, фенология, ботаника,зоология, микология, бактериология, вирусология,...		Учебно-методический комплекс по дисциплине Микробиология и вирусология (название) Учебно-методический комплекс Микробиология и вирусология составлен в соответствии с требованиями Государственного образовательного...
	Микробиология, вирусология и иммунология Рекомендовано Учебно-методическим объединением по медицинскому и фармацевтическому образованию вузов России в качестве учебного пособия...		Микробиология, вирусология микробиология полости рта Структуры внутрибольничных инфекций, вызываемых условно-патогенными микробами и оппортунистами