Васильев Алексей Владимирович прогнозирование и предупреждение синдрома внутрипеченочного холестаза при острых вирусных гепатитах у женщин
Скачать 379.53 Kb.
|
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ диссертацииМатериалы и методы исследования. Наблюдалось 130 женщин, находившихся на лечении в Гродненской областной клинической больнице с острым вирусным гепатитом (ОГА – 113, ОГВ – 17), в возрасте от 18 до 43 лет. У больных отсутствовала сопутствующая, клинически выраженная, острая и хроническая патология (в т.ч. гинекологическая). У всех больных был устойчивый овариальный цикл, продолжительностью 28-30 дней, отсутствовали указания на применение гормональных контрацептивов. Контрольную группу составили 11 здоровых студенток в возрасте 20-22 года и 6 здоровых женщин в возрасте 35-40 лет. Все обследуемые контрольной группы имели устойчивый овариальный цикл и не имели в анамнезе указаний на применение гормональных препаратов и пероральных контрацептивов. Все больные обследовались в соответствии с требованиями приказа Минздрава Республики Беларусь №66 от 22 апреля 1993 г. «О мерах по снижению заболеваемости вирусными гепатитами в Республике Беларусь» и соответствующими протоколами и инструкциями. Кроме исследования общего анализа крови и мочи проводилась оценка стандартных при ОВГ биохимических проб: общий билирубин и его фракции, активность АлАТ, АсАТ, ЩФ, активность Г-ГТП, уровень тимоловой пробы, содержание общего белка, альбумина. Верификация этиологии вирусных гепатитов осуществлялась методом ИФА с использованием стандартных диагностикумов для выявления anti-HAV IgM, HВsAg, anti-HBc IgM, а также ДНК HBV. HCV–, HDV-инфекции были исключены методом ИФА и ПЦР. Определение уровня кортизола, эстрадиола, прогестерона, тестостерона проводилось методом РИА с использованием стандартных реактивов (Корт-1-3Н, Стерон- Е2- 1251, Стерон П- 1251-М, Стерон Т- 1251) в соответствии с инструкциями, утвержденными Управлением по внедрению новых лекарственных средств и медицинской техники Минздрава СССР. Оценка монооксигеназной системы печени у больных проводилась посредством антипиринового теста (АТ) по методике В. Brodie et al., (1949). Определялись наиболее информативные показатели: период полуэлиминации, константа скорости элиминации, общий клиренс, объем распределения, площадь под фармакокинетической кривой. Оценка клеточного и гуморального иммунитета проводилась по методике, рекомендованной Институтом иммунологии Минздрава СССР (Р.В Петров, 1983). Оценка специфического иммуногенеза проведена с использованием тест-систем для выявления anti-HAV IgM (Вектогеп А – IgM). На этапе учета результатов высчитывалась относительная оптическая плотность в исследуемых лунках, определяемая как соотношение оптической плотности исследуемых проб с оптической плотностью стандартного контроля. Показатель относительной оптической плотности анализировался у больных в динамике при повторном исследовании анти-HAV IgM. Для исключения ошибки, связанной с различными показателями оптической плотности контроля, все исследования проводились одномоментно на одних и тех же планшетах (контроль и опыт). Моделирование экспериментального внутрипеченочного холестаза и оценка функции печени животных проводились на 62 крысах-самцах массой 200-240 г совместно с сотрудниками Института биохимии НАН РБ: лаборатория биохимической фармакологии (М.И. Бушма, И.В. Зверинский). ДОХ вводили внутрижелудочно (в/ж) через металлический зонд (250 мг/кг в сутки в слизи крахмала) в течение 8 сут., никетамид (по 50 мг/кг) - внутрибрюшинно (в/б), L- адеметионин вводился в дозе 100 мг/кг (в/б), урсодезоксихолевая кислота (УДХК) вводилась в/ж в дозе 100 мг/кг. Крысы контрольной группы получали равные количества ДОХ или слизи крахмала (в/ж) и 0.85% раствора NaCI (в/б). Через 24 ч после последнего введения веществ животных декапитировали и выделяли микросомальную фракцию печени. Микросомальную и цитозольную фракции печени выделяли дифференциальным центрифугированием постмитохондриального супернатанта на центрифуге VAC – 602 при 105тыс. об./мин. в течение часа. Осадок микросом ресуспензировали в 100мМ трис HCL буфере рН 7,4. Микросомальную и цитозольную фракции разводили буфером в зависимости от цели опыта до концентрации 1, 10, 100 мкг белка/мл. Содержание белка в образцах определяли по методу (O.H Lowrey et al., 1951). Об активности микросомальной УДФ – глюкуронилтрансферазы судили по скорости убыли из инкубационной среды субстрата реакции n-нитрофенола (C. Irvin et. al.., 1980). При расчетах использовали коэффициент молярной экстинкции для n- нитрофенола (рН 7,4) – 9,15 х 106см2/моль. О каталитической активности цитозольной и микросомальной ГТФ судили по скорости образования конъюгатов глутатиона с субстратами (W.H Habig.et. al., 1974). Активность УДФ-глюкозодегидрогеназы определяли по методу (J.L. Strominger et. al., 1957) Содержание цитохромов b5 и Р-450 в микросомальной фракции определяли методом (T. Omura et. al., 1965). Скорости реакций окислительного гидроксилирования ксенобиотиков в микросомальной фракции печени определяли химическими методами по скорости образования продуктов их гидроксилирования (T. Nash et. al., 1953). Методы статистической обработки полученных результатов. Для обработки и систематизации полученных данных использовались стандартные методы статистического анализа, которые реализованы по статистическим программам для медико-биологических исследований из пакета ВМDР и STATISTICA для Windows 98 на персональной ЭВМ IВМ-АТ-486. При определении корреляции между клинико-лабораторными показателями и развитием синдрома холестаза анализ полученных данных проводился ретроспективно. Составлялись ряды, в которых клинико–лабораторные данные сравнивались с показателем развития холестаза, который в вариационных рядах обозначался как «1» при наличии признака и, как «0» при его отсутствии. По аналогичному принципу кодировались показатели, не имеющие цифрового выражения. При статистическом определении корреляции использовались коррелятивные матрицы пакета STATISTICA. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИСЛЕДОВАНИЙ. На основании данных гинекологического анамнеза, позволивших определить фазу овариального цикла, на которую пришлась манифестация болезни, все больные разделены на 4 группы. В 1 группу вошли больные, у которых заболевание началось в течение 1 недели овариального цикла (1 неделя фолликулиновой фазы); ко 2 группе были отнесены больные, у которых первые проявления заболевания были отмечены в ходе 2 недели овариального цикла (2 неделя фолликулиновой фазы и фаза овуляции); 3 группу составили больные, у которых развитие клиники гепатита отмечено на 3 неделе овариального цикла (1 неделя лютеиновой фазы); 4 группа больных представлена пациентами у которых начало клинических проявлений произошло на 4 неделе оварильного цикла (2 неделя лютеиновой фазы). Изучение частоты развития клинически выраженного СХ в группах показало достоверно более высокую частоту этого синдрома в 4 группе больных. Таблица 1 Частота клинически выраженного СХ в группах ( %)
Примечание: в скобках указаны сравниваемые группы, достоверные различия выделены жирным шрифтом. Проведенный ретроспективный коррелятивный анализ сопоставления частоты развития СХ с принадлежностью к группам больных показал наличие достоверной (р<0,0005) коррелятивной связи (r+0,363). Использование непараметрического коррелятивного анализа позволило выявить слабую (Kendall Tau +0,149), но достоверную (р<0,05) коррелятивную связь между выраженностью астенического синдрома в преджелтушном периоде и развитием СХ в разгаре заболевания. Такие клинические параметры, как длительность желтухи, продолжительность лечения и продолжительность болезни, были наименее благополучными в 4 группе больных. Исследование показателей гемограммы в группах больных существенных различий не выявило. Однако отмечены различия лейкоцитарного индекса интоксикации (ЛИИ) при гепатите с клинически выраженным СХ в отличие от ОВГ без СХ. Проведение ретроспективного коррелятивного анализа позволило выявить достоверную (р<0,0005) корреляцию (ЛИИ и холестаз - r +0,32). Таблица 2 Биохимические показатели больных в разгар болезни (М±m)
Примечание: в скобках указаны сравниваемые группы, достоверные различия выделены жирным шрифтом. Исследование биохимических показателей крови в группах больных выявило более высокие показатели билирубина (при наиболее высокой степени его конъюгации) и ЩФ у больных 1 и 4 групп (табл. 2). Как видно из табл. 2, в острую фазу болезни показатели билирубина и ЩФ в 1 и 4 группах больных превышали аналогичные данные больных 2 и 3 групп, а их динамика в процессе болезни также была менее благополучной по срокам восстановления. При этом была установлена коррелятивная связь показателя ЩФ с развитием СХ (+0,685; р<0,000001). Изучение влияния овариального цикла на биохимические показатели проводилось путем перегруппировки биохимических показателей независимо от фазы заболевания, а в зависимости от фазы овариального цикла, в течение которой они получены. В ходе исследования установлено, что наибольшее значение показатели ЩФ имели больные в 1 и 4 группах, отличаясь от таковых во 2 и 3 группах (р<0,05). При данной перегруппировке биохимических показателей проведенный коррелятивный анализ позволил выявить их коррелятивную связь с развитием СХ, в то время как при учете стадий заболевания такая связь выявлялась только у ЩФ. Кроме того, установлено влияние овариального цикла на динамику маркеров СХ. Так из рис. 1 видно, что уровень ЩФ в течение овариального цикла претерпевал выраженный подъем в течение 4 недели овариального цикла. Таблица 3 Корреляция биохимических показателей с частотой развития СХ.
Рис. 1. Зависимость уровня ЩФ от фазы овариального цикла при ОВГ у женщин. На рис. 1 видно, что при охвате патологическим процессом (болезнью) нескольких циклов, тенденция ЩФ к повышению на 4 неделе, может повторяться. Исследование показателей липидограммы и протеинограммы с овариальным циклом не обнаружило никакой связи. Изучение показателей липидограммы в зависимости от варианта течения ОВГ (преобладание цитолиза или холестаза) также не позволило выявить существенных различий в группах больных. Изучение же показателей протеинограммы в зависимости от варианта течения ОВГ, выявило достоверное (р<0,01) отличие в относительных показателях глобулинов при ОВГ с преобладанием в клинике цитолитического синдрома (43,61±1,231г/л) от таковых при ОВГ с СХ (38,17±1,069г/л). Проведенный ретроспективный коррелятивный анализ позволил установить наличие достоверной связи между несколькими показателеми протеинограммы с СХ. Коррелятивная связь этих показателей протеинограммы представлена в таблице 4. Таблица 4 Корреляция показателей протеинограммы с развитием у больных ОВГ клинически выраженного СХ
Изученные показатели клеточного иммунитета не имели коррелятивной связи ни с овариальным циклом, ни с частотой развития СХ при ОВГ. При исследовании показателей гуморального иммунитета их связи с овариальным циклом также не обнаружено, но показатели В-лимфоцитов (как в абсолютном, так и в относительном количестве) достоверно (р<0,01) отличались при ОВГ с преобладанием в клинике цитолиза (71,04±8,567 х 106/л; 3,82±0,456% ) от таковых при ОВГ с СХ (36,49±7,283 х 106/л; 1,84±0,410%). При проведении ретроспективного коррелятивного анализа между числом В-лимфоцитов и частотой развития СХ при ОВГ установлена достоверная (р<0,01) обратная корреляция (Sperman Rank Order (- 0,54)). Другие показатели гуморального иммунитета в том числе и показатели специфического иммуногенеза (анти-HAV IgM) не отличались при различных вариантах течения ОВГ и не давали коррелятивной связи с развитием СХ. Исследование показателей стероидных гормонов в динамике овариального цикла позволило выявить циклические колебания лишь эстрадиола (Е2) и прогестерона (Р). При исследовании кривых Е2 в зависимости от варианта течения ОВГ установлено, что кривая Е2 при ОВГ с преобладанием цитолиза была более деформирована в сравнении с кривыми контроля и при ОВГ с холестазом. Так показатели Е2 к концу 1 недели овариального цикла были достоверно (р<0,05) различимы при различных вариантах гепатита. Судя по максимуму Е2, фаза овуляции при ОВГ с преобладанием цитолиза наступала на 4 дня раньше, чем при ОВГ с СХ, что было достоверным (р<0,05). Уровень Е2 в конце лютеиновой фазы при ОВГ с преобладанием цитолиза был вдвое большим, чем при ОВГ с СХ. Динамика Е2 в течение овариального цикла у больных ОВГ и в контроле представлена на рис. 2.  При изучении динамики Е2 в группах больных установлено, что меньшие его показатели зарегистрированы в 1 группе больных, отличавшейся по уровню Е2 от 2 группы (р<0,01) и 3 группы (р<0,05), а также в 4 группе, где различие со 2 и 3 группами также было достоверным (р<0,005 и р<0,05 соответственно). Таким образом была отмечена связь низких показателей Е2 с развитием СХ при ОВГ. Рис. 2. Кривые эстрадиола (Е2) у больных различными вариантами ОВГв сравнении с контролем. При втором исследовании в 4 группе отмечено снижение уровня Е2. В других группах этот показатель имел тенденцию к нарастанию, поэтому показатели Е2 у больных 4 группы достоверно отличались от таковых в 1, 2 и 3 группах (р<0,00005 , р<0,01 и р<0,05 соответственно). Показатели Е2 в группах больных в динамике патологического процесса представлены в таблице 5. |
Похожие:
 | Осложнения беременности при острых респираторных вирусных инфекциях... О душе. Но все, чтобы ни представлялось необходимым исследовать, мы будем обсуждать, насколько способны, с помощью ума и доказательства,... | | К ю. н. Финансовый кризис: пути преодоления России, их прогнозирование, предупреждение политических и социальных рисков, связанных с ними, предложение решений в области макроэкономической... |
 | «Сестринский уход при гепатитах и циррозах печени» Государственное автономное учреждение Амурской области профессиональная образовательная организация | | Валентин Владимирович Бадрак Стратегии гениальных женщин Резервный день для прохождения гиа в новой форме в 9 классе по математике, истории России, биологии, физике |
| Рабочая программа на 2010/2011 учебный год Класс 11 Учитель: Васильев... Рабочая программа составлена на основании учебной программы, рекомендованной на заседании шмо | | Клинико-эпидемиологическая характеристика парентеральных вирусных... Работа выполнена в гу нии эпидемиологии и микробиологии им. Н. Ф. Гамалеи рамн г. Москва и на кафедре акушерства и гинекологии гоу... |
| Эпидемиологические особенности вирусных гепатитоваиев организованных... Ведущее учреждение гу научно-исследовательский институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. Чумакова М. П. Рамн | | Доклад о состоянии и использовании земель в российской федерации... С. В. Васильев, В. В. Андропов, Н. Н. Антипина, Г. Ю. Елизарова, В. С. Кислов, В. М. Фомин, Е. А. Бородкина, В. П. Боярский, Д. А.... |
| Доклад о состоянии и использовании земель в российской федерации... С. В. Васильев, В. В. Андропов, Н. Н. Антипина, Г. Ю. Елизарова, В. С. Кислов, В. М. Фомин, Е. А. Бородкина, В. П. Боярский, Д. А.... | | Дьяченко Алексей Владимирович Содержание доклада: основные шаги по организации образовательного процесса с использованием электронной учебной среды; особенности... |
| Особенности диагностики и лечения синдрома диспепсии у детей при... Особенности диагностики и лечения синдрома диспепсии у детей при инфицировании CagA-позитивными штаммами Helicobacter pylori | | Галоингаляционная терапия, низкочастотное переменное магнитное поле... |
| Алексей Похабов Алексей Похабов Четыре касты. Кто вы? Экстрасенсорика.... Синегноев Бенедикт Аркадьевич, соавтор Петрушанко (калечит его своими навыками), Зося, состоит с Петрушанко в запутанной связи | | Перечень тем рефератов по дерматовенерологии для поступающих в аспирантуру Принципы системной и местной кортикостероидной терапии при острых и хронических дерматозах |
| Методические рекомендации дс. В 2 кпв. Первая медицинская помощь... «Первая медицинская помощь при несчастных случаях и травмах» дать необходимый объём знаний и практических навыков при оказании первой... | | Реферат к статье Шальновой са, Оганова рг, Деева ад, Кукушкина ск Только 7,2% врачей-мужчин и 3,1% врачей-женщин ответили, что не испытывают стресса на работе. При этом сильный стресс испытывают... |
