Получение антигенов и использование их для разработки средств диагностики и профилактики вирусных инфекций

Скачать 0.75 Mb.

Название	Получение антигенов и использование их для разработки средств диагностики и профилактики вирусных инфекций
страница	4/8
Дата публикации	04.01.2015
Размер	0.75 Mb.
Тип	Автореферат

100-bal.ru > Право > Автореферат

1 2 3 4 5 6 7 8

В соответствии с рекомендациями ВОЗ, все доноры, принимавшие участие в исследовании, были разделены на следующие возрастные группы:

дети 3 - 4 года – вакцинированы в возрасте 1 года живой коревой вакциной (70 сывороток);
дети 9 - 10 лет – вакцинированы в возрасте 1 года и ревакцинированы в 6 лет живой коревой вакциной (50 сывороток);
подростки 16 - 18 лет – вакцинированы в возрасте 1 года и ревакцинированы в 6 лет живой коревой вакциной (72 сыворотки);
доноры возраста 20 - 25 лет – без учета сведений о прививочном анамнезе (71 сыворотка);
доноры возраста 30 - 35 лет – без учета сведений о прививочном анамнезе (46 сывороток);
доноры старше 38 лет – не вакцинированы, без учета сведений о заболевании корью в анамнезе (55 сывороток).

В результате проведенных исследований выявлена возрастная категория доноров с низкими или отрицательными значениями титров противокоревых антител  20-25 лет. Кроме этого установлена не только выраженная корреляция между методами ИФА и РТГА, но и между методами ИФА и РН, что особенно важно, потому что ранее для доказательства наличия протективного иммунитета к кори проводили определение нейтрализующих антител в РН.

Известно, что РТГА является «золотым стандартом» определения антител к вирусу кори и давно используется для серомониторинга. Для доказательства возможности полноценной замены этого метода методом ИФА проведено их сравнение. В эксперименте были исследованы сыворотки, полученные от детей, вакцинированных живой коревой вакциной. Для определение противокоревых антител использовали стандартную РТГА и 3 лабораторные серии ИФА-тест-системы для выявления антител класса G к вирусу кори (табл. 7). Коэффициенты корреляции величин титров антител в исследуемых сыворотках, определенных с помощью ИФА для 1, 2 и 3 серии тест-системы, с РТГА составили соответственно +0,87, +0,86, +0,89. Такая корреляция свидетельствует о высокой степени связи между показателями (Рокицкий П.Ф., 1961). Таким образом, использование ИФА позволили с большей чувствительностью выявлять антитела к вирусу кори в сыворотках крови людей, чем это возможно в РТГА. Учитывая высокие значения коэффициента корреляции между методом ИФА и РТГА, тест-системы на основе иммуноферментного анализа могут успешно использоваться для серомониторинге кори.

Для оценки качества используемых в России тест-систем для определения антител класса G к вирусу кори была разработана и аттестована стандартная панель сывороток, содержащих и не содержащих антитела класса G к вирусу кори «Стандарт АТ-G(+/-)корь». Панель была сформирована таким образом, чтобы сыворотки, вошедшие в нее, не содержали белки ВИЧ и антитела к белкам ВИЧ, НВs-антиген, антитела к вирусу гепатита С. Шесть сывороток не содержали антитела класса G к белкам вируса кори, при этом две из них содержали антитела к основным специфическим белкам вируса краснухи, а две – аутоантитела, явившиеся причиной экзантемы их доноров. Одиннадцать сывороток содержали антитела к белкам вируса кори, их специфическая активность установлена в РТГА и РН. Для этих сывороток специфическая активность противокоревых IgG определена в международных единицах на мл (МЕ/мл). Замена понятия «титр» на понятие «специфическая активность, МЕ/мл» в широкой международной практике была предпринята ВОЗ для стандартизации серологических методов определения противокоревых антител. По заказу ВОЗ Национальным институтом биологических стандартов и контролей Великобритании в 1990 году был разработан первый Международный стандарт противокоревой сыворотки («1^st International Standard, 1990, Anti-Measles antibody 66/202, 5 International Units per ampoule» (World Health Organization, WHO International Laboratory for biological standard, Hertfordshire, EN63QG, England). Каждая ампула с лиофильно высушенным пулом сывороток содержит 10 МЕ противокоревых антител.

Таблица 7

Сравнительные испытания трех лабораторных серий иммуноферментной тест-системы для определения антител к вирусу кори в сыворотках крови людей

№ сыворотки	Титр антител/ номер серии тест системы/реакция
	1 серия		2 серия		3 серия
	РТГА	ИФА	РТГА	ИФА	РТГА	ИФА
1	2	3	4	5	6	7
2	1:8	1:100	1:8	1:100	1:8	1:100
3	1:4	1:200	1:8	1:200	1:4	1:200
4	<1:4	<1:50	<1:4	<1:50	<1:4	<1:50
5	1:32	1:200	1:16	1:200	1:32	1:300
6	1:16	1:200	1:16	1:200	1:16	1:200
7	1:4	1:200	1:4	1:200	1:8	1:200
11	1:32	1:300	1:16	1:300	1:32	1:400
13	1:32	1:800	1:16	1:800	1:32	1:800
14	1:64	1:800	1:64	1:800	1:64	1:800
19	1:64	1:800	1:64	1:800	1:64	1:800
20	1:32	1:200	1:16	1:300	1:32	1:300
23	1:8	1:100	1:8	1:100	1:8	1:100
24	1:16	1:150	1:16	1:150	1:8	1:200
25	1:8	1:100	1:8	1:100	1:8	1:100
26	1:16	1:150	1:16	1:200	1:16	1:200
27	1:16	1:300	1:16	1:400	1:16	1:400
28	1:32	1:200	1:16	1:300	1:32	1:300
29	<1:4	1:50	<1:4	1:50	<1:4	1:100
30	1:64	1:400	1:64	1:400	1:64	1:800
31	1:64	1:300	1:64	1:400	1:64	1:400
32	1:64	1:400	1:64	1:400	1:64	1:400
33	1:32	1:200	1:16	1:200	1:32	1:200
35	1:64	1:800	1:64	1:800	1:64	1:800
36	1:16	1:100	1:16	1:100	1:16	1:200
40	1:16	1:300	1:16	1:300	1:16	1:300
49	<1:4	1:50	<1:4	1:50	<1:4	1:50
57	<1:4	<1:50	<1:4	<1:50	<1:4	<1:50
0316*	1:128	1:2000	1:128	1:2000	1:128	1:2000
0256*	1:64	1:1200	1:64	1:1400	1:64	1:1400
Коэффициент корреляции	0,87		0,86		0,89

* - сыворотки от переболевших пациентов с лабораторно подтвержденным диагнозом корь.

Приготовленная нами панель была откалибрована по этому стандарту при соблюдении условий рекомендованного ВОЗ и утвержденного национальным контрольным институтом ГИСК им. Л.А. Тарасевича теста на параллелизм и линейность для медицинских иммунобиологических препаратов. Панель была аттестована как «Отраслевой Стандартный Образец стандартной панели сывороток крови человека, содержащих и не содержащих антитела класса IgG к вирусу кори» (ОСО 42-28-394-07).

Первые опытно-промышленные серии тест-системы были использованы для оценки параметров серийного продукта. С помощью РТГА были отобраны 76 отрицательных (титр ≤1:2) и 236 положительных (титр ≥1:4) сывороток, среди которых 134 сыворотки имели протективный титр (титр ≥1:8). Результаты сравнительных постановок в ИФА показали, что чувствительность и специфичность тест-системы «Корь-IgG-ДС» не уступает тест-системе «Enzygnost^® Anti-Measles-Virus/IgG» (Dade Behring, ФРГ) и превышает аналогичные показатели тест-системы «Measles IgG ELISA» (Wampole Laboratories, США). Чувствительность тест-системы «Корь-IgG-ДС» составила 98,7 %, специфичность – 96,2 %.

Европейское региональное бюро ВОЗ организовало тестирование тест-системы «Корь-IgG-ДС» в глобальной сети лабораторий Всемирной организации здравоохранения, которое было проведено в 2004-2005 гг. в НИИ эпидемиологии и микробиологии (Минск, Республика Беларусь) и Национальной лаборатории здравоохранения (Ньюфаундленд, Канада). В заключительном отчете показано соответствии результатов тестирования «Корь-IgG-ДС» в сравнении с национальными эталонами при анализе охарактеризованных панелей сывороток, содержащих и не содержащих антитела класса G к вирусу кори. Сделан вывод о полной пригодности тест-системы «Корь-IgG-ДС» для оценки иммунитета к вирусу кори. Государственные испытания в ГИСК имени Л.А. Тарасевича подтвердили эффективность разработанной иммуноферментная тест-система «Корь – IgG-ДС» и она была разрешена для использования на территории Российской Федерации (ФСП 42-0155-7032-05).

Используя высокоспецифичный иммуносорбент, а также рабочую панель сывороток, содержащих и не содержащих антитела класса М к вирусу кори, была разработана ИФА-тест-система для ранней диагностики заболевания. Для панели были отобраны положительные по наличию IgM образцы сывороток больных корью и краснухой с использованием рекомендованной ВОЗ и МЗ и СР РФ коммерческой ИФА тест-ситемы «Enzygnost Anti-Measles-Virus/IgМ» (Dade-Behring, ФРГ). В результате отбора сывороток, подходящих по специфичности, качеству и объемам материала, была сформирована рабочая панель из 16 образцов. Оптимизация тест-системы проходила в 3 этапа: сначала было определено конечное разведение образцов в лунках иммуносорбента, затем была подобрана оптимальная концентрация антигена. Оптимальный титр конъюгата анти-IgM человека с пероксидазой хрена в растворе конъюгата был определен, исходя из установленных первых двух параметров. На третьем этапе главным критерием было достижение 100 % специфичности тест-системы (отсутствие ложноположительного сигнала) с обязательным учетом параметра чувствительность (выявляемость положительных образцов). Примененный алгоритм оптимизации параметров тест-системы позволил добиться 100 % чувствительности и специфичности на охарактеризованной панели сывороток.

Таким образом, в результате проведенных исследований созданы два диагностических препарата, позволяющих выявлять антитела классов G и M к вирусу кори. Препараты успешно прошли испытания на национальном и международном уровнях и показали высокую чувствительность и специфичность в сравнении с лучшими зарубежными аналогами. Для корректного сравнительного испытания разработанных тест-систем была получена панель сывороток, содержащих и не содержащих антитела к вирусу кори «Стандарт АТ-G(+/-)корь» (ОСО 42-28-394-07), специфическая активность сывороток в которой выражается в международных единицах. На базе ЗАО «МБС» было налажено производство промышленных серий тест-систем «Корь – IgG-ДС» и «Корь-IgМ», которые были успешно применены для выполнения национальной программы элиминации кори.

1 2 3 4 5 6 7 8

Похожие:

	Тема: патогенные кокки Овладеть основными методами лабораторной диагностики, терапии и профилактики кокковых инфекций		Паразитарные инфекции у детей Овладение знаниями, умениями и навыками в области природно-очаговых и паразитарных инфекций у детей, включающими этиологию, эпидемиологию,...
	Международный Фестиваль Культуры и Искусства Естественные науки Опытно-экспериментальная... Я решил писать данную работу, чтобы узнать побольше об истории появления тригонометрии, способах решения тригонометрических уравнений...		Разработка и внедрение в медицинскую практику новых методов и средств... ...
	Носитель антигенов Изобретение относится к биотехнологии и иммунологии. Предлагается носитель антигенов в виде липидного комплекса, состоящего из гликозида,...		Некоторые аспекты диагностики tоrch-инфекций в акушерстве Коханского ул., д. 7, г. Чита, 672038, тел. 31-43-23, факс. (302-2) 31-43-24
	Использование презентации на уроке немецкого языка Данное методическое пособие предназначено для специалистов системы профилактики правонарушений несовершеннолетних, их реабилитации...		Клинико-эпидемиологическая характеристика парентеральных вирусных... Работа выполнена в гу нии эпидемиологии и микробиологии им. Н. Ф. Гамалеи рамн г. Москва и на кафедре акушерства и гинекологии гоу...
	Выпускная работа по «Основам информационных технологий» Интерфероны являются многофункциональными компонентами защиты против вирусных и паразитарных инфекций и некоторых опухолей. Они влияют...		Московский энергетический институт (технический университет) Целью дисциплины является получение знаний о современных методах радиоизмерений, о возможностях современной контрольно-измерительной...
	Ротавирусная инфекция у детей: серьезное заболевание Ротавирус – очень заразная группа вирусных инфекций, чаще всего поражающих детей в возрасте от шести месяцев до двух лет. Основные...		эпидемиологическая характеристика внутрибольничных гепатитов в и... Институт эпидемиологии и инфекционных болезней им. Л. В. Громашевского амн украины, заведующий лабораторией вирусных гепатитов и...
	Городского округа красноуфимск постановление О внесении изменений в постановление главы городского округа Красноуфимск №43 от 24. 01. 2011 года «Об утверждении комплексного плана...		Эпидемиологические особенности вирусных гепатитоваиев организованных... Ведущее учреждение гу научно-исследовательский институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. Чумакова М. П. Рамн
	Реферат отчета По Государственный контракту №47 от 31. 03. 2008 г.... ...		«инфекционные болезни» ...

Школьные материалы