На правах рукописи
Орлов Федор Сергеевич
«Анализ и стандартизация лекарственной формы с модифицированным высвобождением нового оригинального отечественного препарата дилепт»
14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук
Москва – 2013
Работа выполнена в ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М.Сеченова Минздрава РФ.
Научные руководители:
доктор фармацевтических наук, профессор Пятин Борис Михайлович;
кандидат фармацевтических наук, доцент Щепочкина Ольга Юрьевна
Официальные оппоненты:
Казьмина Эма Максимовна, доктор фармацевтических наук, ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава РФ, профессор кафедры токсикологии, фармацевтической химии и фармакогнозии.
Ковалева Елена Леонардовна, доктор фармацевтических наук, центр экспертизы и контроля готовых лекарственных средств ФГБУ НЦЭСМП Минздрава РФ, заместитель директора.
Ведущая организация: ГБОУ ВПО Ярославская государственная медицинская академия Минздрава РФ
Защита состоится « 17 » апреля 2013 г. в 14 часов
на заседании Диссертационного совета Д.208.040.09 ГБОУ ВПО Первый МГМУ имени И.М.Сеченова Минздрава РФ, по адресу: 119019, г. Москва, Никитский бульвар, д. 13.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО Первый MГМУ им. И.М.Сеченова Минздрава РФ по адресу: 117998, г. Москва, Нахимовский проспект, д. 49.
Автореферат разослан « » марта 2013 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета,
доктор фармацевтических наук
|
Наталья Петровна Садчикова
|
Общая характеристика работы
Актуальность исследования.
Создание эффективных и безопасных лекарственных препаратов является одной из основных задач, стоящих сегодня перед фармацевтической наукой. Существуют два основных пути решения данной проблемы - это или создание новых активных фармацевтических субстанций и соответствующих лекарственных форм на их основе или разработка новых лекарственных форм, обеспечивающих оптимальную терапевтическую эффективность уже известных и хорошо зарекомендовавших себя лекарственных веществ. Дилепт является новым оригинальным отечественным лекарственным препаратом, созданным в учреждении Российской академии медицинских наук Научно-исследовательском институте фармакологии имени В.В. Закусова РАМН (директор, академик РАМН Середенин С.Б.). Дилепт – атипичный нейролептик дипептидной структуры - характеризуется отсутствием экстрапирамидной симптоматики, наличием положительного мнемотропного действия, способностью снижать нейротоксические эффекты глутамата и наличием антиоксидантной активности. К сожалению, действующее вещество дилепта обладает коротким периодом полувыведения и для поддержания эффективных концентраций дилепта в системном кровотоке рекомендуется применение таблетированных лекарственных форм через короткие интервалы времени. В связи с этим для упрощения режима дозирования и повышения эффективности терапии целесообразно разработать лекарственные формы с модифицированным высвобождением дилепта, в частности лекарственные формы пролонгированного действия.
Неотъемлемым этапом на пути создания новой лекарственной формы и ее внедрения в клиническую практику является процесс стандартизации. Поэтому разработка методик анализа и установление норм качества пролонгированной лекарственной формы дилепта является актуальной проблемой.
Цель исследования
Целью настоящей работы являлась разработка методик анализа и стандартизация пролонгированной лекарственной формы (таблеток с модифицированным высвобождением) оригинального отечественного препарата дилепта.
Задачи исследования:
Изучить особенности стандартизации лекарственных веществ пептидной природы и лекарственных форм с модифицированным высвобождением, в частности пролонгированных таблетированных лекарственных форм.
Выбрать условия проведения теста растворения дилепта, таблеток пролонгированного действия.
В соответствии с требованиями нормативной документации выбрать и определить допустимые значения показателей качества дилепта, таблеток пролонгированного действия.
На основании теоретических и экспериментальных данных разработать и валидировать методики анализа показателей качества дилепта, таблеток пролонгированного действия.
Разработать нормативную документацию (проект ФСП) на дилепт, таблетки пролонгированного действия.
Научная новизна.
В рамках данного исследования впервые определены показатели качества и разработаны методики анализа дилепта, таблеток пролонгированного действия. Впервые изучены физико-химические свойства пролонгированной лекарственной формы, выбраны условия хроматографического анализа, позволяющие разделить дилепт, компоненты плацебо, а также технологические примеси, которые могут присутствовать в субстанции. Показана возможность и выбраны условия количественного анализа пролонгированной лекарственной формы дилепта методами ВЭЖХ и УФ спектрофотометрии. Разработана методика теста «Растворения» дилепта, таблеток пролонгированного действия. Впервые изучено поведение пролонгированной лекарственной формы дилепта в биорелевантной среде (FaSSiF).
Практическая значимость.
Разработаны методики анализа для пролонгированной лекарственной формы дилепта. Разработанные методики были внедрены в НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН для анализа пролонгированной лекарственной формы этих препаратов. Оформлен проект ФСП на дилепт, таблетки пролонгированного действия.
Апробация работы.
Апробация работы проведена на кафедральной конференции кафедры фармацевтической и токсикологической химии фармацевтического факультета ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И. М. Сеченова.
Личный вклад автора.
Автору принадлежит ведущая роль в разработке методики, анализе и обобщении полученных результатов, проведении аналитической и статистической обработки результатов. Вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии на всех этапах исследования: от постановки задач, их экспериментально - теоретической реализации до обсуждения результатов в научных публикациях, докладах и внедрения в практику. Разработаны и включены в проект фармакопейной статьи предприятия точные и воспроизводимые методики стандартизации дилепта, таблеток пролонгированного действия, 50 мг.
Соответствие диссертации паспорту научной специальности.
Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия. Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 2 и 3 паспорта фармацевтическая химия, фармакогнозия.
Публикации.
По материалам диссертации опубликовано 7 печатных работ, в том числе 2 статьи в изданиях, рекомендуемых ВАК России.
Связь темы исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в рамках комплексной темы кафедры фармацевтической и токсикологической химии ПМГМУ имени И.М. Сеченова «Разработка современных технологий подготовки специалистов с высшим медицинским и фармацевтическим образованием на основе достижений медико-биологических исследований». Номер государственной регистрации: 01.2.006 06352.
Основные положения, выносимые на защиту:
Результаты исследований по разработке методик определения подлинности, посторонних примесей, количественного содержания, однородности дозирования для дилепта, таблеток пролонгированного действия, валидация данных методик.
Исследования растворения таблеток дилепта пролонгированного действия в традиционных условиях, рекомендованных ОФС «Растворение» и в биорелевантных средах, валидация методик теста растворения.
Обоснование предварительных норм качества дилепта, таблеток пролонгированного действия.
Объем и структура работы.
Диссертация изложена на 127 стр. машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, выводов, библиографического указателя, включающего 158 источников и 1 приложения. Работа иллюстрирована 24 рисунками и 32 таблицами.
Объекты и методы исследования
Объектами исследований являлись образцы твердой дозированной лекарственной формы дилепта, таблетки пролонгированного действия, 50 мг, субстанция дилепта, промежуточные продукты его синтеза - N-капроил-L-пролин и метиловый эфир L-тирозина, а также продукт его гидролиза - N-капроил-L-пролил-L-тирозин. Экспериментальные образцы субстанции дилепта, промежуточных продуктов его синтеза и гидролиза были синтезированы в химическом отделе ФГБУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова» РАМН. Твердая дозированная лекарственная форма дилепта, таблетки пролонгированного действия, была изготовлена в лаборатории готовых лекарственных форм опытно-технологического отдела ФГБУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова» РАМН (зав. лаборатории – д.ф.н., проф. К.В. Алексеев). В анализе использовались серии 031111, 040112,050312. Изучение физико-химических свойств, разработку методик анализа и установление норм качества пролонгированной лекарственной формы дилепта проводили в лабораториях аналитической группы опытно-технологического отдела ФГБУ «НИИ Фармакологии имени В.В. Закусова» РАМН (руководитель аналитической группы – к. ф. н. Л.Н. Грушевская) и на кафедре фармацевтической и токсикологической химии ГБОУ ВПО Первого московского государственного медицинского университета имени И.М.Сеченова. Разработку методик определения подлинности, родственных соединений, количественного содержания и однородности дозирования проводили на жидкостном хроматографе LC-10AT (Shimadzu, Япония) с фиксированным объемом петли 20 мкл, снабженным спектрофотометрическим детектором UV-VIS SPD-10A с переменной длиной волны. Разделение изучаемых соединений проводили на колонках Ultra 5 мкм С18, 250 мм 4,6 мм (Restek, CША) и Luna 5 мкм С18, 250 мм 4,6 мм (Phenomenex, CША). Элюирование проводили в изократическом режиме, температура термостата колонки – комнатная. Тест «Растворение» проводили на аппаратах Erweka DT-6 («Erweka», Германия), и Pharma Test DT 70-6 («Pharma-Test», Германия) типа «лопастная мешалка», частота оборотов 50 об/мин, объем среды растворения 500 мл. Количество дилепта, перешедшего в среду растворения, определяли методом УФ-спектрофотометрии на УФ-спектрофотометре UV-1700 («Shimadzu», Япония).
Определение показателей качества пролонгированных таблеток дилепта проводили в соответствии с требованиями Государственной Фармакопеи XI издания, выпуск 1 и 2, Государственной Фармакопеи XII издания, часть I , ОСТ 91500.05.001-00. «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения», ОФС 42 0003-04 «Растворение», а также общих статей Европейской фармакопеи 7 издания и Американской фармакопеи USP 33 NF 29. Валидацию методик анализа проводили в соответствии с требованиями международной конференции по гармонизации технических требований к регистрации лекарственных средств, используемых в медицине (ICH), общих статей Европейской фармакопеи 7 издания и Aмериканской фармакопеи USP 33 NF 29, а также Методическими рекомендациями Федеральной Службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития.
Анализ и стандартизация твердой дозированной лекарственной формы дилепта, таблетки пролонгированные.
Важнейшим условием получения эффективного и безопасного препарата является его надлежащий контроль качества. Ключевым элементом системы контроля качества производимой продукции является её стандартизация, т.е. разработка единых норм и предъявляемых к ней требований. Стандартизация лекарственного средства включает в себя выбор показателей, характеризующих качество, разработку и валидацию методик анализа по выбранным показателям и установление соответствующих числовых норм.
В соответствии с ОСТ 91500.05.001.00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения» пролонгированные таблетки должны контролироваться по следующим физико-химическим показателям качества: описание, подлинность, средняя масса, тест растворение, посторонние примеси (родственные соединения), микробиологическая чистота, однородность дозирования, количественное определение.
Определение подлинности
По химическому строению дилепт представляет собой метиловый эфир N-капроил-L-пролил-L-тирозина (рисунок 1) и содержит в своем составе кратные связи, а также ароматический фрагмент (остаток тирозина). Наличие данных групп дает нам возможность предположить способность дилепта избирательно поглощать ультрафиолетовый свет.
С21Н30N2O5 Мм 390,48
Рисунок 1. Структурная формула метилового эфира N-капроил-L-пролил-L-тирозина (Дилепта).
При анализе раствора субстанции дилепта (0,1 мг/мл) в области длин волн от 250 до 350 нм был получен УФ-спектр с четким максимумом поглощения при 278±2нм (см. рисунок 2).
Рисунок 2. УФ-спектр раствора дилепта в этаноле 95% (0,1 мг/мл).
Наличие в УФ-спектрах характерного максимума поглощения, а также относительно высокие значения молярных показателей поглощения позволяют предположить возможность использования метода УФ-спектроскопии для определения подлинности дилепта в пролонгированных таблетках. Возможность использования данного метода была подтверждена снятием спектра раствора плацебо, таблеточной массы и РСО. Подлинность дилепта, таблеток пролонгированного действия, 50 мг, устанавливали по наличию максимума поглощения при 278±2нм на УФ-спектре полученного раствора в области от 250 до 350 нм.
Валидацию данной методики проводили по показателю «Специфичность», используя растворы плацебо, модельной смеси и РСО субстанции дилепта.
Вторым методом определения подлинности был выбран метод ВЭЖХ. Подлинность пролонгированных таблеток определяли по совпадению времени удерживания пика на хроматограмме испытуемого раствора со временем удерживания пика на хроматограмме раствора сравнения. Определение подлинности проводили одновременно с определением «Количественного содержания» (см. п .3.2).
Методика количественного определения
Количественное определение дилепта в таблетках пролонгированного действия проводили методом ВЭЖХ, используя метод внешнего стандарта. Одновременно с количественным определением нами было предложено проводить идентификацию дилепта в таблетках по соответствию времен удерживания пика дилепта в лекарственной форме и пика стандартного образца дилепта.
Испытуемый раствор и раствор РСО хроматографировали в следующих условиях: колонка Luna C18 (250 x 4,6 мм); подвижная фаза - ацетонитрил - фосфатный буферный раствор (1:1) с рН 3,8±0,2, скорость потока подвижной фазы – 0,5 мл/мин; длина волны детектирования 278 нм, температура колонки комнатная, объем вводимой пробы 20 мкл. Содержание дилепта (Х) в одной таблетке в граммах рассчитывают по формуле:
где:
Ss1-площадь пика дилепта на хроматограмме испытуемого раствора
Ss2- площадь пика дилепта на хроматограмме раствора РСО
mr – масса навески РСО, г
mm – средняя масса таблетки, г
ms – навеска испытуемого образца, г
W– содержание дилепта в РСО, %
Подлинность устанавливали по соответствию времени удерживания пика дилепта на хроматограмме испытуемого раствора со временем удерживания пика дилепта на хроматограмме раствора РСО. Типичная хроматограмма образцов таблеток дилепта пролонгированного действия представлена на рис. 3.
Рисунок 3. Хроматограмма извлечения из таблеток дилепта пролонгированного действия (λ=278 нм).
Результаты количественного определения в образцах таблеток дилепта пролонгированного действия представлены в таблице 1.
Таблица 1. Времена удерживания и степени разделения дилепта в модельных растворах.
№ п/п
|
Вещество
|
Время удержания, мин
|
Площадь пика
|
Фактор асимметрии пика
|
Содержание дилепта
|
1
|
Дилепт (PCO) – среднее значение из 5 измерений
|
11,345
|
1110091
|
1,04
|
0,0501 г
|
2
|
Дилепт (таблеточная масса)
|
11,303
|
1110218
|
1,049
|
Валидация разработанной методики установления подлинности и количественного определения в таблетках дилепта, 50 мг пролонгированного действия, включала определение пригодности хроматографической системы, линейности (значение коэффициента корреляции - 0,998), прецизионности (сходимости и внутрилабораторной прецизионности) (относительное стандартное отклонение –менее 2%), специфичности и правильности (относительная погрешность – менее 1,5%).
Тест пригодности хроматографической системы выполняли путем оценки не менее 5 хроматограмм раствора РСО. Из результатов пяти вводов, рассчитывали среднее число теоретических тарелок (N), фактор асимметрии (Т) и относительное стандартное отклонение. По результатам проверки пригодности хроматографической системы должны выполняться следующие условия:
- Эффективность хроматографической колонки должна быть не менее 3500 теоретических тарелок;
- Фактор асимметрии должен быть в диапазоне от 0,8 до 1,5;
- Относительное стандартное отклонение результатов отдельных измерений площадей пиков дилепта не должно превышать 2%.
|
