Значение показателей процессов пероксидации липидов, иммунологических маркеров воспаления в диагностике бронхиальной астмы у детей раннего возраста
Скачать 1.85 Mb.
|
| Глава II. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.1. Общая характеристика наблюдаемых больных и методы исследования В настоящей работе проведены клинические наблюдения и специальные биохимические исследования у 106 детей раннего возраста от 6-х мес. до 3-х лет с бронхолегочными заболеваниями. Пациенты были разделены на 4 группы, представленные в таб.1. Контрольная группа сформирована по методу паракопий и составила 25 здоровых детей, аналогичного возраста. Таблица 1 Характеристика наблюдаемых больных по группам
ДИЗАЙН ИССЛЕДОВАНИЯ  III. Биохимические методы: 1. определение фракций фосфолипидов в эритроцитах 2.определение продуктов пероксидации липидов с раздельной регистрацией продуктов ПОЛ (ИДС, ДК, КТ+СТ, ШО) в гептановой и изопропанольной фазах экстракции. 3. определение β-адренергической активности эритроцитов и холиэстеразной активности плазмы. 4.Составление математической модели ранней диагностики БА II. Иммунологические методы: Определение активности IL2 и IL10 IV. Катамнез группы детей с ООБ и аллергической предрасположенностью через 2 года n=11 Рис. 1. Дизайн исследования Дизайн исследования представлен на рис.1. Критерии включения больных в проведенное исследование следующие: − добровольное информированное согласие родителей пациентов на проведение исследование. − возраст от 6 мес. до 3-х лет, включительно; − больные с диагнозом острый бронхит; − больные с диагнозом острый обструктивный бронхит, при отсутствии аллергических заболеваний в семейном анамнезе, 1-2 эпизода бронхообструкции на момент обследования; − больные с диагнозом острый обструктивный бронхит с наличием аллергических заболеваний в семейном анамнезе и первым эпизодом бронхообструкции; − больные с уточненным диагнозом БА в периоде обострения на фоне острой респираторной инфекции (ОРИ); − исследования проводились в первые сутки поступления в детский стационар (на 2-3-й день от начала заболевания); − практические здоровые дети, сопоставимые по полу и возрасту. Критерий исключения: больные с пневмонией, туберкулезом, опухолью, бронхолегочной дисплазией, наследственной или врожденной патологией бронхолегочной системы, ВПС и сосудов. Клиническое наблюдение за детьми проводились на базе ГБУЗ ТО «ОКБ №2». Педиатрическое отделение № 2. (главный врач − Сливкина Наталья Александровна; зам. главного врача по детству Бодрова Татьяна Васильевна). Набор контрольной группы проводился на базе ММАУ ДГП №4 (главный врач Княжева Наталья Николаевна.) В табл. 2 представлена характеристика наблюдаемых больных по возрасту, полу, нозологиям. Примечание: в данной таблице и последующих в скобках представлены значения частоты признаков, отражающих соотношение числа анализируемых признаков к общему значению вариационного ряда. Таблица 2 Характеристика наблюдаемых больных по возрасту полу, нозологиям
Из табл. 3 видно, что среди наблюдаемых детей преобладают мальчики. Известно, что мальчики чаще имели бронхолегочную патологию, чем девочки в связи с анатомо−физиологическими особенностями. Так, у мальчиков по данным исследований определяется более узкий диаметр бронхов, повышенный тонус гладкой мускулатуры бронхиального дерева и более высокий уровень Ig E [75, 166, 194]. Диагноз бронхиальной астмы основывался на совокупности клинического наблюдения и обследования больных с учетом генеалогического анамнеза, преморбидного фона, лабораторных, иммунологических исследований и рентгенографии органов дыхания, проведенной с целью дифференциальной диагностики. В работе за основу взята классификация БА, представленная в Национальной программе «Бронхиальная астма у детей. Стратегия лечения и профилактика» (2012г). Под наблюдение в работе взяты дети раннего возраста с диагнозом БА, обострение которой связано с ОРИ. При определении степени тяжести заболевания учитывали степень тяжести приступа, наличие или отсутствие ночных приступов, переносимость физической нагрузки. Обоснование диагноза обструктивного бронхита проводилось с учетом клинического симптомокомплекса, лабораторного и рентгенологического обследования пациентов, генеалогического анамнеза и преморбидного фона. В работе за основу взята классификация клинических форм бронхолегочных заболеваний у детей Российского респираторного общества, принятой в 2009г. Под аллергической предрасположенностью у пациентов 3 группы мы понимали неполный аллергологический анамнез, включающий либо наличие наследственной атопии у кровных родственников ребенка, либо наличие острых аллергических реакций на специфические агенты (чаще пищевые аллергены или медикаменты). На каждого обследованного ребенка была составлена информационная карта, где тщательно были собраны анамнестические сведения о родителях, течение беременности и родов матери, наследственный и аллергический анамнез, клиническое состояние ребенка, данные лабораторных, инструментальных (рентгенография органов грудной клетки, электрокардиография, эхокардиография, пульсоксиметрия), иммунологических методов исследования и проведенной терапии. Клиническое наблюдение, функциональные и лабораторные исследования проводились в острую фазу заболеваний в первые сутки поступления в стационар (на 2-3 сутки заболевания). Лабораторные и инструментальные методы исследования у наблюдаемых детей для постановки диагноза представлены в следующем объеме: − общий анализ крови и мочи, кал на яйца глистов; − рентгенография органов грудной клетки проводилась у больных детей во всех группах − 100%. − электрокардиографическое и ЭХО крадиографическое исследования проводились с целью дифференциальной диагностики этиологии БОС в 100%; − пульсоксиметрия для определения сатурации и тяжести БОС в 100%. Специальные биохимические методы исследования Наряду с общеклиническими анализами в соответствии с поставленной целью и задачами проведены специальные исследования. Специальные исследования проведены в биохимической лаборатории ТюмГМА заведующий ЦНИЛ к.м.н. доцент Платицын Виктор Анатольевич; старший научный сотрудник, к.б.н. Журавлева Татьяна Дмитриевна. Иммунологические исследования проводились в отделе клинической иммунологии, клинико – диагностической лаборатории ГБУЗ ТО «Перинатальный центр», г. Тюмени (зав. лаборатории Хмелёва Елена Федоровна). Краткая характеристика специальных методов исследования 1.Уровень интерлейкинов (IL)− IL 2 и IL 10 определяли в сыворотке крови. Определение уровня интерлейкина 2, интерлейкина 10 в сыворотке крови больных детей проводили с использованием наборов реагентов «Вектор-Бест» (IL 2 − ИФА-Бест, IL 10 – ИФА - Бест), разработанных ЗАО «Вектор Бест» (Новосибирск), методом твердофазного иммуноферментного анализа, с применением пероксидазы хрена в качестве индикаторного фермента, согласно прилагаемым инструкциям. Специфическими реагентами набора являются моноклональные антитела к анализируемым интерлейкинам. Содержание интерлейкинов выражали в пг/мл, (норма IL 2 составляет 12,35±0,4; IL 10 составляет 1,12 ±0,03). 2. Определение активности холинэстеразы (ХЭ) сыворотки крови (КФ 3.1.1.8). Данный фермент катализирует гидролиз ацетилхолина, и его активность может определенным образом влиять на вегетативный дисбаланс в бронхолегочной системе. Определение активности ХЭ выполнено с помощью кинетического колориметрического теста согласно рекомендациям DGKC, используя наборы реактивов фирмы «SENTINEL» (Италия). Активность фермента выражена в международных Е/л; референтные пределы активности фермента, обозначенные в инструкции к набору, составляют у мужчин −5100−11700, у женщин – 4000 – 12600 Е/л. По данным [54] у здоровых детей до 6 месяцев активность холинэстеразы может быть на 40 − 50 % ниже, чем у взрослых, то есть от 2500 до 5850 Е/л. 3.Определение β – адренергическую активность мембран эритроцитов (β −АРМ) оценивали в цельной крови [108]. Фотометрической метод данных авторов основан на изменении осмотической резистентности клеток под влиянием β – адреноблокатора. Регистрируется торможение гемолиза эритроцитов, помещенных в гипоосмотическую среду, в присутствии β – адреноблокатора. Результаты выражают в условных единицах торможения (усл. ед). Нормальные величины показателя адренореактивности (β −АРМ) у практически здоровых лиц находятся в диапазоне от 2,0 до 20,0 усл. Ед., что отражает повышение осморезистентности эритроцитов в результате связывания адреноблокатора с β – адренорецепторами. При сниженной адренореактивности количество β − адренорецепторов на мембранах эритроцитов снижено (десенситизация), связывание адреноблокатора уменьшается и осморезистентность эритроцитов повышается в меньшей степени. В соответствии с условиями метода определения величины β − АРМ при этом превышают 20 усл. ед. Для выполнения анализа использовались наборы реагентов « БЕТА − АРМ − АГАТ» (Москва). 4.Определение продуктов пероксидации эритроцитов проведено спектрофотометрическим методом И.А. Волчегорского с сотр.,(1989) в модификации. Особенностью данного метода является то, что после экстракции липидов смесью гептан – изопропанол содержание липопероксидов определяют отдельно в гептановой и изопропанольной фазах экстракта на длинах волн 220, 232, 278 и 420 нм. Раздельная регистрация продуктов ПОЛ в гептане и изопропаноле дает возможность более дифференцировано оценивать их содержание по степени насыщенности и окисленности. Это связано с тем, что изопропанолом экстрагируются преимущественно липиды, содержащие ненасыщенные жирные кислоты, в том числе те, которые образовались в результате процессов пероксидации, а в гептановой фазе преобладают соединения с насыщенными жирными кислотами. Результаты выражают в единицах оптической плотности – Е. Анализировались следующие группы веществ: Е220 − вещества с изолированными двойными связами (ИДС), потенциальные продукты ПОЛ; Е232 − диеновые конъюгаты (ДК) – первичные продукты ПОЛ содержащие остатки жирных кислот с сопряженными двойными связами, т.е. метаболически неустойчивые и подвергающиеся дальнейшее пероксидации и разрушению; Е278 – сумма кетодиенов и сопряженных триенов (КД+СТ). Кетодиены метаболически активные вещества, которые содержат кетогруппу и далее разрушаются в цепных реакциях свободнорадикального окисления (СРО). Сопряженные триены так же метаболически очень активные продукты пероксидации и могут так же разрушаться по пути СРО. Но в то время, они являются соединениями необходимыми для синтеза лейкотриенов и простагландинов, т. е их образование является необходимым звеном в формировании защитных реакций. На длине волны 420 нм – Е420 регистрируют шиффовы основания (ШО) – продукты нейтрализации токсичных веществ образующихся в реакциях пероксидации, их классифицируют как шлаки, балласт, подлежащий выведению из организма. Результаты замеров оптической плотности использовались далее для расчетов индексов окисленности липидных компонентов (ИОЛ) гептановой и изопропанольной фаз: ИОЛГ232, ИОЛГ278, ИОЛИ232, ИОЛИ278. Индексы рассчитывали как отношение содержания продукта ПОЛ к содержанию веществ с изолированными двойными связами (ИДС). Для гептановой связи ИОЛГ232 = Е232/ Е220 и ИОЛГ278= Е278/ Е220. Для изопропанольной фазы ИОЛИ232= Е232/ Е220 и ИОЛИ278= Е278/ Е220 Раздельная регистрация продуктов ПОЛ дает так же возможность оценить степень ненасыщенности (СНН) липидов изопропанольной фазы относительно гептановой на разных длинах волн. СНН220= Е220И / Е220Г; СНН232= Е232И / Е232Г; СНН278= Е278И / Е278Г [45 ,113]. 5.Способность к антирадикальной и антиперекисной защите красных клеток крови оценивали по активности супероксиддисмутазы (СОД) и каталазы (Кат). Супероксиддисмутаза (КФ 1.15.1.1) катализирует реакцию дисмутации двух молекул супероксиданионрадикала до относительно менее реакционных метаболитов – молекулярного кислорода и перекиси водорода. Принцип метода определения активности СОД [18] основан на ингибировании процесса восстановления нитросинего тетразолия в фотохимической системе рибофлавин − свет –N-N-N-N- тетра-этилендиамин – кислород в присутсвии ферментного препарата. Активность фермента оценивают по степени торможения реакции восстановления −% торможения. Каталаза (перекись водорода – оксидоредуктаза, КФ 1.11.1.6) катализирут разрушение перекиси водорода до воды и молекулярного кислорода. Принцип метода определения активности фермента [148] основан на способности каталазы, разрушать перекись водорода: изменение концентрации последней в среде инкубации регистрируется спектрофотометрически на длине волны 220нм. Активность фермента выражена в млмоль/ мл/ мин. 6.Определение содержания фосфолипидов (ФЛ) в эритроцитах осуществляли в 3 этапа. Первый этап заключался в экстракции липидов из гемолизата эритроцитов смесью флороформ – метанол 2:1 (по Фолчу −Блюру) и упаривания полученного экстракта до сухого остатка. На втором этапе из полученного экстракта методом тонкослойной хроматографии на силикагеле выделяли отдельные фракции ФЛ [53] На пластинах ФЛ идентифицировали по стандартам (фосфатидилхолин, лизофосфатидилхолин), а так же по величинам Rf. Выделяли и далее анализировали 5 основных фракций: фосфатидилэтаноламин (ФЭА), фосфатидилхолин (ФХ), сфингомиелин (СФМ), фосфатидилсерин (ФС), лизофосфатидилхолин (ЛФХ). На третьем этапе проводили количественное определение каждой фракции ФЛ: после элюирования и сжигания органической части в муфельной печи в полученном остатке определяли неорганический фосфор (PH) по методу [33]. Результаты выражали млмоль/л PH. Суммировав выделенные компоненты, определяли общие ФЛ и рассчитывали процентные соотношения между фракциями. Конечные результаты выражали в процентах от общего содержания фосфолипидов. Анализировали также легкоокисляемые (ЛОФ) и трудноокисляемые (ТОФ) фосфолипиды: к группе ЛОФ относят ФЭА и ФС, ТОФ – ФХ и СФМ. Проведен анализ величины окисляемости липидов (ВОЛ), которая рассчитывается как соотношения ТОФ/ ЛОФ [41]. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Похожие:
 | Роль неспецифических опухолевых маркеров и клинико-морфологических... Нительного профессионального образования «Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей Федерального агентства... |  | Теоретические основы проблемы адаптации детей раннего возраста к... Психологические особенности детей раннего возраста |
| Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Особенности развития детей раннего возраста. Конспект (Н. М. Аксарина «Воспитание детей раннего возраста») | | Иммуномодулирующая терапия в комплексном лечении неконтролируемой бронхиальной астмы у детей Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Ульяновский государственный... |
| «Неотложная и отдаленная эффективность комбинированной терапии среднетяжелой... Работа выполнена в гбоу впо первый Московский государственный медицинский университет имени И. М. Сеченова | | План работы городского методического объединения проблемная группа... Цель: Создание модели социального партнёрства педагога доу с родителями детей раннего возраста |
| Клинико-морфологическое обоснование периодической гипобарической... Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Оренбургская государственная... | | Клинико-функциональные особенности бронхиальной астмы у детей с грибковой... Цель: создание творческой и психолого-педагогической среды для развития инновационного педагога, осуществляющего деятельность по... |
| Патоморфологическая характеристика тимуса у детей по материалам аутопсий актуальность В последние годы появился ряд отдельных научных публикаций, характеризующих экспрессию некоторых иммуногистохимических маркеров в... | | Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Цель: получения работы по специальности дошкольного образования, квалификации воспитатель детей дошкольного возраста с дополнительной... |
| Эпидемиология и эффективность современных методов диагностики и лечения... Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Уральская Государственная медицинская... | | Реферат статьи «От внешней регуляции к саморегуляции: ранние родительские... «От внешней регуляции к саморегуляции: ранние родительские прототипы управляющих функций у детей раннего возраста» |
| Учебно-методический комплекс по дисциплине «Основы педиатрии и гигиены... «Основы педиатрии и гигиены детей раннего и дошкольного возраста» включает три блока документов: организационные документы, методические... | | Учебно-методический комплекс по дисциплине «Основы педиатрии и гигиены... «Основы педиатрии и гигиены детей раннего и дошкольного возраста» включает три блока документов: организационные документы, методические... |
| Учебно-методический комплекс по дисциплине «Основы педиатрии и гигиены... «Основы педиатрии и гигиены детей раннего и дошкольного возраста» включает три блока документов: организационные документы, методические... | | Изучение генетической предрасположенности к атопической бронхиальной... Работа выполнена в лаборатории химической геномики Учреждения Российской академии медицинских наук Научно-исследовательском институте... |
