Отчет по проекту №2 2/5309 «Моделирование процессов функционирования сопряженных ферментативных систем в клетке на примере ферментов светящихся бактерий» аналитической

Скачать 2.25 Mb.

Название	Отчет по проекту №2 2/5309 «Моделирование процессов функционирования сопряженных ферментативных систем в клетке на примере ферментов светящихся бактерий» аналитической
страница	6/17
Дата публикации	02.03.2015
Размер	2.25 Mb.
Тип	Отчет

100-bal.ru > Физика > Отчет

1 2 3 4 5 6 7 8 9 ... 17

1.2. Сравнительный анализ физико-химических характеристик растворимых ферментов и ферментов, иммобилизованных совместно с субстратами

В работе проведено сравнение кинетических и термодинамических характеристик растворимой и иммобилизованной в полимерные гели различной природы биферментной системы НАДН:ФМН-оксидоредуктаза-люцифераза с целью выбора метода получения стабильного и высокоактивного реагента для биолюминесцентного анализа.

1.2.1 Сравнение субстратной специфичности растворимой и иммобилизованной биферментной системы НАДН:ФМН-оксидоредуктаза- люцифераза

На рис. 1.2.1 представлены зависимости интенсивности свечения биферментной системы НАДН:ФМН-оксидоредуктаза-люцифераза от концентрации субстратов в координатах Иди-Хофсти. Рассчитанные кажущиеся константы Михаэлиса для растворимой и иммобилизованной биферментной системы представлены в Табл. 1.2.1.

В результате иммобилизации биферментной системы происходит увеличение кажущихся констант Михаэлиса для всех трех субстратов по сравнению с растворимыми ферментами. Однако для ферментов, иммобилизованных в крахмальный гель, увеличение K_m_каж для ФМН и НАДН происходит в 2 и 2,5 раза, соответственно. Для ферментов, иммобилизованных в желатиновый гель, изменения K_m_каж по сравнению с растворимой биферментной системой является более существенным: K_m_каж увеличивается в 4 и 5 раз для ФМН и НАДН, соответственно. Для тетрадеканаля наблюдалось увеличение K_m_каж в 4 и 6 для ферментов, иммобилизованных в желатиновый и крахмальный гели, соответственно.

Увеличение K_m_каж для иммобилизованных ферментов можно объяснить тем, что в процессе иммобилизации ферментов происходит ограничение конформационной лабильности белковых молекул, отражающееся в скорости каталитического акта. Это ограничение усугублялось фактом совместной иммобилизации 2 ферментов. Субстратом для люциферазы являлся продукт реакции, катализируемый оксидоредуктазой - ФМНН₂, который является крайне нестойким соединением и быстро окисляется кислородом воздуха до ФМН.

а) ФМН, б) НАДН, в) миристиновый альдегид. 1 - растворимые R+L; 2 - R+L, иммобилизованные в крахмальный гель; 3 - R+L, иммобилизованные в желатиновый гель

Рисунок 1.2.1 - Зависимость интенсивности свечения биферментной системы НАДН:ФМН-оксидоредуктаза-люцифераза от концентрации субстратов в координатах Иди-Хофсти.
Таблица 1.2.1.

Значения кажущихся констант Михаэлиса для биферментной системы НАДН:ФМН-оксидоредуктаза-люцифераза

Субстраты Биферментная система	K_m_каж (мг/мл)
Субстраты Биферментная система	ФМН	НАДН	Тетрадеканаль
Растворимые R+L	(0,6 ± 0,1) x 10^-3	(3,4 ± 0,7) x 10^-2	(0,18 ± 0,04) x 10^-6
R+L, иммобилизованные в крахмальный гель	(1,3 ± 0,3) x 10^-3	(9,0 ± 1,8) x 10^-2	(1,2 ± 0,2) x 10^-6
R+L, иммобилизованные в желатиновый гель	(2,8 ± 0,6) x 10^-3	(17,9 ± 3,5) x 10^-2	(0,7 ± 0,1) x 10^-6

Еще одной причиной снижения сродства субстратов к ферментам является то, что в структуре матрикса оказываются иммобилизованными не только комплексы люциферазы и оксидоредуктазы, но и сами эти ферменты по отдельности. В этом случае увеличение констант Михаэлиса происходит в результате диффузионных ограничений, возникающих при доставке ФМНН₂между пространственно разнесенными в геле ферментами.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 ... 17

Похожие:

	Тема: Ферменты как биологичексие катализаторы. Кинетика ферментативных реакций Цель: Установить основные принципы обнаружения ферментов в биологических объектах (на примере амилазы и уреазы). Ознакомиться с основными...		Реферат Разработка метода оценки физического состояния спортсменов... Разработка метода оценки физического состояния спортсменов с использованием биолюминесцентной системы светящихся бактерий
	Метаболизм: фазы и стадии. Общий путь катаболизма Формирование представлений о метаболизме как совокупности взаимосвязанных ферментативных реакций в клетке, специфических и общей...		Рабочая программа моделирование транспортных процессов направление... Моделирование транспортных процессов: рабочая программа / авт сост. В. Б. Вилков, спб.: Ивэсэп, 2013. – 21 с
	Агентно-ориентированное моделирование поведения сложных систем в среде интернет Представлена реализация среды моделирования на основе системы моделирования дискретных событий, позволившая комплексировать агентно-ориентированное...		Математическое моделирование экономических систем «Основы математического моделирования экономических систем» должно способствовать развитию у студентов более глубокого понимания...
	Примерной программы дисциплины Компьютерное моделирование систем... Срс) различного назначения, в том числе систем мобильной связи (смс) и систем радиодоступа (срд), а также обеспечить развитие...		Рабочая программа по дисциплине опд. Ф. 08 Моделирование и оптимизация... Курс «Моделирование и оптимизация технологических процессов» является прикладной наукой, занимающейся вопросами моделирования рациональных...
	Рабочая программа по дисциплине опд. Ф. 08 Моделирование и оптимизация Курс «Моделирование и оптимизация технологических процессов» является прикладной наукой, занимающейся вопросами моделирования рациональных...		Отчет по проекту №38: Разработка рекомендаций по реализации Болонского... Программы: Научно-методическое обеспечение функционирования и модернизации системы образования
	Квантово-химическое моделирование нелинейно-оптических характеристик... Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте органической и физической химии		Тема Бактерии Бактерии. Многообразие бактерий. Строение и жизнедеятельность бактерий. Размножение бактерий
	Нормальная физиология Обучение системному подходу в процессе изучения физиологических механизмов и процессов, лежащих в основе функционирования органов...		Программа научного семинара " Моделирование и оптимизация бизнес процессов " Программа предназначена для преподавателей, ведущих данную дисциплину, учебных ассистентов и студентов направления 080500. 68 Бизнес-информатика...
	Программа предназначена для преподавателей, ведущих данную дисциплину,...		Рабочая программа учебной дисциплины проектирование информационных... Целью дисциплины является: изучение методологии структурного анализа, моделирование информационных систем в стандарте idef, проектирование...

Школьные материалы