Скачать 0.96 Mb.
|
На правах рукописи Киль Владимир Ильич Теоретическое обоснование и практическое использование молекулярно-генетических методов в защите сельскохозяйственных растений от вредителей и оценке трансгенных растений на биобезопасность Специальность: 06.01.07- защита растений АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Краснодар, 2010 Работа выполнена в государственном научном учреждении – Всероссийском научно-исследовательском институте биологической защиты растений Россельхозакадемии (ВНИИБЗР) в 2001-2010 гг. Официальные оппоненты: доктор биологических наук, Волчков Юрий Андреевич доктор биологических наук, Мироненко Нина Васильевна доктор биологических наук, Антонова Татьяна Сергеевна Ведущая организация: ГНУ Краснодарский научно-исследовательский институт им. П.П. Лукьяненко Защита состоится 27 октября 2010 г. в 9.00 часов на заседании диссертационного совета ДМ 220.038.06 при ФГОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044, г.Краснодар, ул. Калинина, 13. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет», с авторефератом – на сайте ВАК: referat_vak@obrnadzor.gov.ru Автореферат разослан и размещен на сайте « » июля 2010 г. Ученый секретарь диссертационного совета, профессор Горьковенко В.С. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Для успешного осуществления программ защиты сельскохозяйственных растений от вредных членистоногих необходимо изучение биологии и генетики популяций как вредных, так и полезных насекомых. Это включает в себя знание генетической структуры популяций, миграционных процессов (динамики), акклиматизации, поведенческих реакций, условий размножения, отношения полов и трофических связей. Значительный прогресс в этом отношении был достигнут в 50-60-е годы прошлого столетия, благодаря использованию классических генетических принципов и подходов. Изучение популяционных процессов насекомых исследователи проводили, главным образом, с помощью видимых и хорошо различимых фенотипических маркеров (морфологических и фенетических) таких, как цвет глаз, полосы и пятна, волоски или шипы на теле особи. Это приблизило ученых к пониманию закономерностей распространения насекомых, их поведенческих реакций, включая половые отношения, и наследования отдельных генов, контролирующих те или иные признаки [Behura, 2006]. Использование молекулярно-генетических подходов, начиная с белковых маркеров в 1970-х годах, главным образом изоферментов и позже ДНК-маркеров, во многом способствовало более глубокому пониманию исследуемых закономерностей в популяциях насекомых. Большинство ДНК-маркеров, используемых сегодня – это продукты полимеразной цепной реакции (ПЦР). ДНК-маркеры позволяют анализировать и объяснять популяционные процессы там, где этого не могут сделать никакие другие методы исследований. Использование ДНК-маркеров необходимо для анализа структуры популяций как полезных насекомых – паразитов и хищников, так и вредителей. Кроме того, они могут использоваться для целей таксономии и филогении [Roehrdanz, Flanders, 1993; Mitchell et al., 2006]. С их помощью можно разделить таксоны насекомых, т.е. биотипы, подвиды, близкородственные виды, а также виды-двойники, т.е. виды, которые трудно различить морфологически или каким-то другим способом [Mitchell et al., 2005, Mitchell, Samways, 2005; Silva-Brandao et al., 2008]. Несмотря на столь широкие возможности ДНК-маркеров, в нашей стране в генетических исследованиях популяций вредителей преобладает использование морфологических и фенетических маркеров. На их основе исследователи продолжают изучать динамику, поведенческие реакции и строят прогнозы о развитии резистентности насекомых к инсектицидам, главным образом для сельскохозяйственно значимых вредителей [Фасулати, Вилкова, 2000; Сухорученко, 2001, 2005; Король, Новосельская, 2001; Беньковская и др, 2004; Ростовцева, 2005]. Несмотря на то, что фенетические маркеры просты для использования и часто проявляются на протяжении всего жизненного цикла организма, они имеют ряд существенных недостатков. Основными ограничениями их использования является то, что хорошо различимые фены относительно редки и встречаются далеко не у всех видов насекомых. Проблема идентификации вида по морфологическим признакам в отдельных случаях значительно затрудняется из-за существования видов-двойников. Кроме того, модификационная изменчивость фенетических маркеров, как правило, весьма значительна, что затрудняет оценку и прогноз динамики популяционных процессов. Более того, идентификация таких маркеров должна базироваться на знании их генетического контроля и того, как гены, контролирующие этот признак, наследуются в потомстве. Использование для этих целей современных методов молекулярно-генетического анализа, в частности ПЦР-метода и полученных на его основе ДНК-маркеров, может во многом способствовать решению этих проблем. Важно отметить, что использование ДНК-маркеров не умаляет применения фенетических и других морфологических критериев в практике защиты растений от вредителей, но лишь дополняет их и расширяет возможности для популяционных исследований видов насекомых, не имеющих четких фенетических признаков, позволяет повысить точность мониторинга и прогноза. Кроме того, с использованием ДНК-маркеров появляется возможность проследить динамику отдельных генетических элементов, отдельных хромосомных локусов, генов и аллелей генов в популяциях, оценить гетерозиготность, гетерогенность и сходство популяций непосредственно на генетическом уровне и другие параметры, которые невозможно оценить с помощью морфологических критериев. Таким образом, сегодня исследователям недостает точных методов анализа и прогноза в популяциях вредных и полезных насекомых для целей мониторинга и защиты. Существует также недостаток знаний о молекулярно-генетической структуре популяций насекомых и закономерностях ее изменчивости под влиянием стрессовых факторов внешней среды. В этой связи данные исследования, несомненно, актуальны и представляют интерес для практики защиты растений от вредных насекомых. В то же время многие эксперты по сельскому хозяйству считают, что проблема нехватки продовольствия не может быть решена без применения ДНК-технологий и в частности генной инженерии. Генетическая инженерия по сути продолжает направление традиционной селекции по улучшению генотипов полезных растений, но достигает той же цели более эффективным и быстрым путем. На сегодняшний день генетическая инженерия уже располагает большим арсеналом знаний и методов для эффективного переноса полезных генов из одних организмов в другие [Романов, 2000]. На этой основе уже созданы многие сорта трансгенных или генетически-модифицированных растений (ГМР) и некоторые виды ГМ-насекомых, которые нашли применение в мировой практике защиты сельскохозяйственных растений от вредителей. Однако их использование в нашей стране и в частности ГМ-растений сдерживается недостаточным изучением вопросов их экологической безопасности. В этой связи данные исследования также актуальны и могут найти свое отражение в практике защиты растений на этапе предрегистрационных испытаний и пострегистрационного мониторинга ГМР и продукции на их основе. Цель и задачи исследований. Основной целью исследований являлось теоретическое обоснование применения молекулярно-генетических методов в практике защиты сельскохозяйственных растений от вредных насекомых и оценке трансгенных Bt-защищенных растений на экологическую безопасность и на этой основе разработка новых методов мониторинга популяций вредителей и трансгенов. Для достижения цели исследований были поставлены следующие задачи:
Научная новизна.
Практическая значимость результатов исследований.
Основные положения, выносимые на защиту:
Апробация работы. Исследования проводились в 2001-2010 гг. в Всероссийском научно-исследовательском институте биологической защиты растений Россельхозакадемии (ВНИИБЗР) по программе фундаментальных и приоритетных прикладных исследований РАСХН по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса Российской Федерации на 2006-2010 гг. «Разработать агротехнологии интегрированной защиты растений, использования биобезопасных, экологичных и экономически эффективных химических и биологических средств защиты растений нового поколения, сортов сельскохозяйственных культур, устойчивых к вредным организмам, и на их основе региональных систем управления процессами фитосанитарного оздоровления агроценозов» по этапу «Разработать системы технологий фитосанитарного оздоровления и стабилизации агроценозов на основе оптимизации их по экономической эффективности, биологической и экологической безопасности». Основные результаты исследований ежегодно докладывались на ученых советах ВНИИБЗР, а также научно-практических конференциях: Международной конференции "Трансгенные растения – новое направление в биологической защите растений" (ВНИИБЗР, Краснодар, 2002); третьей региональной научно-практической конференции молодых учёных "Научное обеспечение агропромышленного комплекса" (КубГАУ, Краснодар, 2001); Международной конференции «Генетически модифицированные источники пищи: оценка безопасности, законодательно-нормативная база, маркетинг», (Москва. 2003); Всероссийской научно-технической конференции "Биотехнология 2003" (Сочи, 2003); VII Всероссийском конгрессе «Здоровое питание населения России» (Москва, 2003); 2-м Московском международном конгрессе: "Биотехнология: состояние и перспективы развития" (Москва,2003); 5-ой региональной научно-практич. конф. молодых ученых «Научное обеспечение агропромышленного комплекса» (Краснодар, КубГАУ, 2003); Международной конференции «Биологическая защита растений – основа стабилизации агроэкосистем» (Краснодар, ВНИИБЗР, 2004); III съезде ВОГиС, «Генетика в XXI веке: современное состояние и перспективы развития» (Москва, 2004); Отчетной научной конференции грантодержателей РФФИ (Сочи, 2004); IV Семинаре-совещании «Средства защиты растений, регуляторы роста, агрохимикаты и их применение при возделывании сельскохозяйственных культур» (Анапа, 2005); Отчетной научной конференции грантодержателей РФФИ (Сочи, 2005); международной конференции «Актуальные вопросы экологии и природопользования» (Ставрополь, 2005); Втором Всероссийском Съезде по защите растений (Санкт-Петербург, 2005); 3-ей международной конференции из серии «Наука и бизнес» «Международное сотрудничество в биотехнологии: ожидания и реальность» (2006,Пущино); Международной научно-практической конференции «Биологическая защита растений – основа стабилизации агроэкосистем» (Краснодар.2006); отчетной конференции грантодержателей регионального конкурса РФФИ и администрации Краснодарского края «ЮГ-РОССИИ», «Вклад фундаментальных исследований в развитие современной инновационной экономики Краснодарского края» (пос. Агой туапсинского р-на-2006, 2007, 2008); Международной научно-практической конференции «Агротехнический метод защиты растений от вредных организмов» (Краснодар, 2007); 2-й Всероссийской научно-практической конференции Ставропольского отделения Русского энтомологического общества РАН «Проблемы энтомологии Северо-Кавказского региона» (Ставрополь, 2007); 13 съезде Русского энтомологического общества (Краснодар.2007); международной конференции «Информационные системы диагностики, мониторинга и прогноза важнейших сорных растений, вредителей и болезней сельскохозяйственных культур» (Санкт-Петербург–Пушкин, 2008); международной конференции «Биологическая защита растений – основа стабилизации агроэкосистем» (Краснодар, 2008); II Международной научно-практической интернет-конференции «Актуальные вопросы энтомологии» (Ставрополь, 2009); Х сессии Генеральной Ассамблеи ВПРС МОББ и Международной научно-практической конференции «Биологические основы регулирования вредных организмов в агроценозах» (Киев, 2009). Работа поддержана субвенциями Миннауки: "Оценка биологической эффективности генно-инженерно-модифицированных растений (ГИМР) и разработка методов оценки их биоценотической безопасности", а также РФФИ и администрацией Краснодарского края: гранты №№ 03-04-96772, 06-04-96737, 06-04-96644, 09-04-96514, 09-04-96556 и грантом МНТЦ №3768. Публикации. Основные положения диссертации изложены в 70 научных трудах, в том числе монографии и 9 статьях - в изданиях, рекомендуемых ВАК для публикации основных результатов диссертации на соискание ученой степени доктора наук. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 348 страницах машинописного текста, состоит из введения, шести глав, выводов, рекомендаций, списка литературы и четырех приложений; содержит 48 таблиц и 60 рисунков. Список литературы содержит 404 источника, из них 66 на русском языке. Автор выражает искреннюю благодарность и признательность всем соавторам проведенных исследований: сотрудникам сектора биотехнологии, к.б.н. А.П. Савве и сотрудникам лаборатории гербологии; Ж.А.Ширинян, к.б.н. М.В.Пушне и другим сотрудникам лаборатории массового разведения и применения энтомоакарифагов; к.б.н. И.С. Агасьевой и сотрудникам лаборатории поддержания гос. коллекции энтомоакарифагов; д.б.н. О.Д. Ниязову, д.б.н. В.Г.Коваленкову, а также зам. директора ВНИИБЗР к.б.н. В.Я.Исмаилову и директору ВНИИБЗР академику РАСХН, профессору В.Д.Надыкте за помощь и поддержку в проведении данных исследований. СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ |
Российская академия сельскохозяйственных наук Защита растений от вредителей: Учебник для вузов / под ред. В. В. Исаичева. М.: Колос, 2002. 472с с ил | Строение клеток растений и грибов Защита растений от вредителей: Учебник для вузов / под ред. В. В. Исаичева. М.: Колос, 2002. 472с с ил | ||
Отдел надзора внутреннего карантина растений, качества и безопасности... Защита растений от вредителей: Учебник для вузов / под ред. В. В. Исаичева. М.: Колос, 2002. 472с с ил | Грант нш-197. 2008. 4 Роль организации и экспрессии генетического... Работа была основана на использовании обширных генетических коллекций кафедры генетики и селекции спбгу с использованием генетических,... | ||
Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... ... | Урок по теме «Сожительство растений с грибами и бактериями. Бактериальные... Цель урока: организовать знакомство обучающихся с ролью грибов и бактерий в жизни растений | ||
Тема программы Формирование устойчивых популяций микроорганизмов и вредителей культурных растений к воздействию ядохимикатов | Урок-соревнование по природоведению. Тема. «О наземных защитниках урожая» Цели урока. В игровой форме повторить знания об отраслях растениеводства. Сформировать представления о биологической защите сельскохозяйственных... | ||
Роль комнатных растений в жизни людей. Разновидности комнатных растений Цели: познакомить учащихся с ролью комнатных растений в жизни человека; разновидностями комнатных растений | Урока в теме Дата Тема урока Тип урока Знать: многообразие жизненных форм растений, особенности органов растений, давать характеристику общих признаков растительных организмов,... | ||
Отчет о научно-исследовательской работе, выполняемой по государственному... «Разработка алгоритмов для биоинформационного анализа комплексных метаболических и молекулярно-генетических сетей» | Биологическими Защита растений от вредителей: Учебник для вузов / под ред. В. В. Исаичева. М.: Колос, 2002. 472с с ил | ||
Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Цель урока: Повторить классификацию растений, значение растений в жизни человека. Познакомить с новой группой растений комнатными... | Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Цель урока: повторить классификацию растений, значение растений в жизни человека, познакомить с новой группой растений комнатными... | ||
Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Цель урока: повторить классификацию растений, значение растений в жизни человека, познакомить с новой группой растений комнатными... | Программа по формированию навыков безопасного поведения на дорогах... Цель урока: повторить классификацию растений, значение растений в жизни человека, познакомить с новой группой растений комнатными... |