Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «башкирский государственный аграрный университет» современные основы рационализации
Скачать 3.23 Mb.
|
  МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ» СОВРЕМЕННЫЕ ОСНОВЫ РАЦИОНАЛИЗАЦИИ ТЕХНОЛОГИИ ВОСПРОИЗВОДСТВА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ В УСЛОВИЯХ ИНДУСТРИАЛЬНОЙ СИСТЕМЫ ПРОИЗВОДСТВА В АПК Материалы всероссийской молодежной научной школы в рамках Федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы (Уфа, Россия, 11-14 сентября 2012 г.) Уфа Башкирский ГАУ 2012 УДК 636 ББК 45/46 С 56 Ответственный за выпуск: канд. с.-х. наук, доцент, проректор по научной и инновационной деятельности ФГБОУ ВПО Башкирский ГАУ И.Г. Асылбаев Редакционная коллегия: канд.с.-х.н., доцент Ф.Р. Валитов д-р с.-х.н., профессор Р.Р. Султанова канд.с.-х.н., доцент Л.В.Герасимова канд.с.-х.н., ассистент А.Г. Ильясов С 56 Современные основы рационализации технологии воспроизводства сельскохозяйственных животных в условиях индустриальной системы производства в АПК. Материалы всероссийской молодежной научной школы в рамках Федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы (Уфа, Россия, 11-14 сентября 2012 г.). – Уфа: Башкирский ГАУ, 2012. – 216 с. ISBN 978-5-7456-0314-3 В сборнике опубликованы доклады выступлений участников всероссийской молодежной научной школы «Современные основы рационализации технологии воспроизводства сельскохозяйственных животных в условиях индустриальной системы производства в АПК» в рамках Федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы. Материалы сборника посвящены актуальным проблемам научных исследований в области биотехнологии, современных проблем ветеринарного акушерства и биотехники репродукции животных, совершенствованию воспроизводства и селекции сельскохозяйственных животных. Статьи приводятся в авторской редакции. Авторы опубликованных статей несут ответственность за патентную чистоту, достоверность и точность приведенных фактов, цитат, экономико-статистических данных, собственных имен, географических названий и прочих сведений, а также за разглашение данных, не подлежащих открытой публикации. УДК 636 ББК 45/46 ISBN 978-5-7456-0314-3 © Башкирский ГАУ, 2012 УДК 619:636.1 СОСТОЯНИЕ И ПЕРСПЕКТИВЫ ТЕХНОЛОГИИ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ В КОНЕВОДСТВЕ Л.Ф.Лебедева ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт коневодства, г. Рязань Технология трансплантации эмбрионов лошадей начала развиваться в начале 70-х годов прошлого столетия. Метод трансплантации эмбрионов позволяет получать по 10 и более жеребят в год от одной ценной племенной кобылы; а также от выдающихся спортивных кобыл без выключения их из режима соревнований, либо от ценных кобыл, способных к зачатию, но по разным причинам не способных выносить плод. Эмбрионы можно перевозить в течение 1-2-х суток в специальных средах при температуре (+37)ºС или (+ 5)ºС с целью последующей пересадки, а также неопределенно долго хранить и транспортировать их в замороженном виде в жидком азоте (-196ºС). Жеребят-трансплантатов, родившихся от одной кобылы и разных жеребцов-производителей в ставке года можно испытывать в одной возрастной группе (экспресс-оценка жеребцов по качеству потомства). Сущность метода сводится к тому, чтобы избавить ценную кобылу от 11-месячного процесса вынашивания плода и передать эту миссию суррогатной матери. Для этого из матки кобылы-донора нехирургическим методом извлекают 7-8-суточный эмбрион и пересаживают его в матку синхронизированной по фазе полового цикла кобыле-ре ципиенту. В следующем половом цикле кобыла-донор снова будет готова к зачатию и очередной процедуре трансплантации эмбриона. Таким образом, удается более эффективно работать с маточными семействами и тиражировать удачные сочетания подобранных пар, способствуя селекционному прогрессу. Современные технологии предусматривают работу со свежими, охлажденными и замороженными эмбрионами. Процент приживляемости свежих и охлажденных эмбрионов несколько выше, чем замороженных (70-85% против 55-60% [1]. В настоящее время ведущее положение в области трансплантации эмбрионов занимают США, Аргентина и Бразилия. К странам, использующим эмбриопересадки в коневодстве в меньших масштабах, относятся Австралия, Канада и большинство европейских государств, в частности Австрия, Франция, Италия, Греция, Финляндия, Швеция, Дания, Германия, Венгрия. В сравнении с другими отраслями животноводства, особенно со скотоводством, где индустрия трансплантации эмбрионов располагает сетью криобанков, в которых хранятся зародыши с определенным происхождением и полом, наша отрасль сильно отстает и сопоставима с козоводством (Таблица 1). Таблица 1 Статистика пересадок эмбрионов сельскохозяйственных животных в странах Европы по годам [2]
*некоторые страны не представили данные ** эмбрионы получены методом искусственного оплодотворения (IVP- In Vitro Production) - нет данных Данные таблицы 1 наглядно демонстрируют наращивание темпов использования технологии эмбриотрансплантации в европейском коневодстве, за исключением 2010 года, очевидно отражающего последствия мирового экономического кризиса. В скотоводстве, напротив, бурный всплеск интереса к новым репродуктивным технологиям на рубеже ХХ-ХХI веков постепенно сменяется стабильным уровнем использования метода эмбриопересадок в рутинной практике воспроизводства. Следует уточнить, что в массе ежегодно трансплантируемых в Европе эмбрионов КРС, примерно, 50-60% составляют замороженные эмбрионы и 5-10% - эмбрионы, полученные методом искусственного оплодотворения (IVP- In Vitro Production). В европейском коневодстве сообщения о пересадках эмбрионов «из пробирки» появляются лишь с 2006 года. Причин такого положения дел в коневодстве несколько. Проблема вызова суперовуляции у кобыл выражается в дефиците эмбрионов для работы (например, у коров после гормональной обработки можно в одном половом цикле извлечь до 30 эмбрионов, а у кобыл, в силу физиологических особенностей, лишь 1-2 эмбриона [3]. Продолжительная охота и непредсказуемость сроков овуляции создают проблемы синхронизации половых циклов донора и реципиента. Процедура извлечения и пересадки эмбрионов требует высокой квалификации исполнителей и существенных материальных затрат (средняя стоимость эмбриопересадки в Америке сегодня составляет от 2000$ до 5000 $). Но главная причина состоит в системе ограничений (арабская, американская стандартбредная порода и др.) и запретов (английская чистокровная верховая порода, Palomino Ponies, American Suffolk Horse и др.) некоторых породных регистров/ассоциаций на выдачу племенных документов для жеребят-трансплантатов. Тем не менее, большинство Советов ведущих спортивных, рысистых и выставочных пород мира допускают жеребят-трансплантатов к записи в племенные книги. В их числе тракененские, голштинские, ахалтекинские, практически все «теплокровные» западноевропейские лошади. Под натиском научно-технического прогресса, передовых технологий и здравого смысла консерваторы постепенно сдают свои позиции и включают эмбриопересадки в селекционные программы разведения лошадей. В России первый жеребенок-трансплантат родился в феврале 1982 года в лаборатории физиологии размножения лошадей ВНИИ коневодства [4]. Автором отечественной технологии эмбриопересадки С.Г.Лебедевым было получено около 40 жеребят-трансплантатов. После научно-исследовательского «застоя» и экономического кризиса времен перестройки сотрудники лаборатории продолжили изыскания в области трансплантации эмбрионов лошадей. В числе последних разработок: методы культивирования in vitro и криоконсервации ранних (6-8 суток) эмбрионов, нехирургического извлечения эмбрионов предимплантационных стадий (вплоть до 40-х суток развития). Проведены фундаментальные исследования в области раннего эмбриогенеза лошадей на основе гистологии и электронной микроскопии. Начата работа по выделению и исследованию регенерационных возможностей эмбриональных стволовых клеток лошадей. В последнее время оживляется интерес коневладельцев к эмбриотрансплантации, растет квалификация российских специалистов. Эта тенденция обнадеживает и внушает надежду на дальнейшее развитие отечественной коневодческой науки и практики. Литература: 1.Squires, EL, McCue, PM and Vanderwall, D (1999) The current status of equine embryo transfer. Theriogenology 51 91-110 2. www.aete.eu/publications 3. Niswender, KD, Alvarenga, MA, McCue, PM, Hardy, QP and Squires EL (2003) Superovulation in cycling mares using equine follicle stimulating hormone (eFSH). J Equine Vet Sci 23 487-500 4.Лебедев, С.Г. Трансплантация эмбрионов лошадей [Текст] //Дисс. на соиск. уч. ст. д.б.н. ВНИИК. Дивово,1994. УДК 636.52/58.082.2 АЛЛЕЛЬНЫЕ ВАРИАНТЫ ГЕНОВ, КОНТРОЛИРУЮЩИХ ХОЗЯЙСТВЕННО-ПОЛЕЗНЫЕ ПРИЗНАКИ У КУР ГЕНОФОНДНЫХ ПОРОД В.П. Терлецкий, Д.О. Доронин, В.И. Тыщенко, А.Б. Вахрамеев ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт генетики и разведения сельскохозяйственных животных, г. Санкт-Петербург-Пушкин Хозяйственно-полезные признаки контролируются многими генами, полиморфизм которых можно изучить, используя метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Цель наших исследований заключалась в выявлении генетической изменчивости по аллельным вариантам кур 10-ти генофондных пород с использованием двух генов – интрона 2 гена гормона роста (GHR) и гена инсулиноподобного фактора роста (IGF-1). Известно, что эти гены связаны со скоростью роста у птиц и млекопитающих [1,2]. Кроме того, есть данные, что продукт гена инсулиноподобного фактора роста связан с воспроизводительными качествами кур [3]. Материалом исследования служили образцы крови, взятой из подкрыльцовой вены кур 10-ти пород и экспериментальных популяций (по 12 образцов в каждой группе). ДНК из крови выделяли по общепринятым методикам. Следующим этапом работы была амплификация последовательностей ДНК в интроне 2 гена гормона роста (GHR) и гена инсулиноподобного фактора роста (IGF-1). Последовательность нуклеотидов праймеров и некоторая другая информация представлена в таблице 1. Праймеры подбирались с таким расчетом, чтобы продукт амплификации имел сайт рестрикции для ферментов HindIII и PstI для генов GHR и IGF-1, соответственно [4]. Таблица 1 Последовательности праймеров для амплификации интрона 2 гена гормона роста (праймеры 1 и 2) и гена инсулиноподобного фактора роста (праймеры 3 и 4)
После синтеза отобранных праймеров нами были подобраны оптимальные условия проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР) с этими праймерами. Реакцию проводили в 25 мкл реакционной смеси, содержащей 67 мМ трис -HCl pH 8,6 - 2,5 мM MgCl2 - 16,6 мM NH4OH - 0,125 мМ каждого из дезоксирибонуклеотидтрифосфатов (dATP, dGTP, dCTP, dTTP) -0,5 мкМ праймера - 50-100 нг геномной ДНК и 2,5 ед Taq-полимеразы ("Силекс М", Москва или ООО "Биолаб", Санкт-Петербург). Реакцию проводили на амплификаторе "Терцик". Использовали режим, состоящий из 35 циклов: 30 сек - 94˚С, 1 мин 37˚С, 1 мин - 72˚С. В качестве способа выявления аллельных вариантов был использован метод ПЦР-ПДРФ, когда продукт специфической амплификации подвергался расщеплению ферментом рестрикции. Наличие или отсутствие сайта расщепления определяет размер фрагмента ДНК. В пробирку помещали 25 мкл амплификата непосредственно в ПЦР-буфере, добавляли 0,5 мкл рестриктазы HindIII/PstI, перемешивали и ставили инкубировать на 3 часа при 37оC. После завершения расщепления ДНК ферментами рестрикции проводили электрофорез. Для электрофореза использовали 0,8% агарозные гели, содержащие флуоресцентный краситель бромистый этидий. Электрофорез проводили в течение 1 часа при рабочем напряжении 150 В. В качестве маркера, позволяющего оценить длину фрагментов ДНК на геле использовали фрагменты ДНК FastRuler Middle Range (размер фрагментов 100 п.н - 5000 п.н.). После расщепления продуктов амплификации ферментом HindIII/PstI и разделения полученных фрагментов ДНК в агарозном геле, флуоресцентный сигнал фотографировали в системе гель-документации фирмы Bio-Rad. Амплификация гена и расщепление фрагмента ДНК приводит к выявлению аллельных вариантов генов, как в гомозиготном, так и в гетерозиготном состоянии (рисунок 1). М 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12  Рисунок 1 Результаты рестрикции (фермент PstI) ДНК Царскосельской породы кур по гену IGF-1. (М-маркер, № 2 и 8 – гомозиготный генотип С1С1, № 3 и 11 – гетерозиготный генотип С1С2, № 1,4,5,6,7,9,10,12 – гомозиготный генотип С2С2). Метод ПЦР-ПДРФ, использованный на 10 породах и популяциях кур (Голошейная, Пушкинская, Фавероль, Аврора, Род-Айланд, Орловская, Царскосельская, Кохинхин, Узбекская бойцовая, Брама) по интрону гена GHR не выявил достоверных различий по частотам встречаемости аллельных вариантов. В то же время, анализ образцов ДНК по аллелям гена IGF-1, проведенный на 7 генофондных породах кур показал наличие достоверных различий между породами (таб. 2). Таблица 2 Генотипы 7 пород и популяций кур, выявляемые методом ПЦР-ПДРФ по гену IGF-1 (12 голов в каждой группе).
Были обнаружены гомозиготные варианты организации этого гена С1С1 (621 п.н., отсутствие рестрикции) и С2С2 (257 и 364 п.н.), а также гетерозиготный вариант С1С2 с длинами фрагментов ( 257, 364 и 621 п.н. ) Таким образом, метод ПЦР-ПДРФ можно использовать для выявления аллельных вариантов гена инсулиноподобного фактора роста в генофондных породах и популяциях кур с целью их генетической характеристики Литература:
УДК 619:616.5:636.1 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Добавить документ в свой блог или на сайт
Похожие:
 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение... Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования |  | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение... Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования |
| Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение... Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «орловский государственный... | | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение... Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования |
| Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение... Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования | | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение... Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования |
| Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение... Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования | | Министерство сельского хозяйства РФ федеральное государственное бюджетное... Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования |
| Ставропольский государственный аграрный университет Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования | | Ставропольский государственный аграрный университет Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования |
| Ставропольский государственный аграрный университет Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования | | Ставропольский государственный аграрный университет Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования |
| Ставропольский государственный аграрный университет Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования | | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального... Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «орловский государственный аграрный... |
| Ставропольский государственный аграрный университет утверждаю Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования | | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение... Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования |
